KAEDAH PEMBUDAYAAN MIKROORGANISME. KAJIAN KEBUDAYAAN DAN BIOSEMIK
HARTA
Penanaman, iaitu penanaman mikroorganisma di makmal, digunakan untuk mengkaji sifatnya dan mendapatkan biomas. Bakteria, kulat, actinomycetes, spirochetes dan beberapa protozoa ditanam pada media nutrien. Klamidia, rickettsia, virus dan beberapa protozoa hanya dapat membiak dalam tubuh haiwan atau dalam sel hidup.
Sifat budaya mikroorganisma jenis ini adalah: 1) keadaan yang diperlukan untuk pembiakan, dan 2) sifat pertumbuhan pada media nutrien. Sifat budaya adalah salah satu ciri yang diambil kira semasa mengenal pasti (menentukan jenis) mikroorganisma.
Media budaya
Media budaya mesti memenuhi syarat tertentu. Mereka mesti mengandungi semua nutrien yang diperlukan untuk pembiakan mikrob jenis ini. Beberapa mikroorganisma patogen tumbuh pada media nutrien sederhana, yang lain memerlukan penambahan darah, serum darah, dan vitamin untuk pembiakannya.
Dalam media kultur, syarat-syarat tertentu mesti dibuat dengan menambahkan larutan natrium klorida atau buffer. Bagi kebanyakan bakteria, medium nutrien yang mengandungi 0,5% natrium klorida disukai. Tindak balas medium nutrien, yang disukai oleh kebanyakan bakteria patogen, sedikit alkali, yang sepadan dengan pH = 7.2-7.4. Vibrio cholerae tumbuh pada pH = 7.8-8.5, cendawan - pada pH = 5-5.5. Media kultur harus lembap, yakni berisi jumlah air yang cukup, selembar dan steril mungkin, iaitu sebelum menyemai, tidak mengandungi mikroba.
Dari segi komposisi dan asalnya, media nutrien adalah semula jadi, buatan dan sintetik. Media budaya semula jadi adalah produk semula jadi seperti kentang dan sayur-sayuran lain. Media nutrien buatan disediakan mengikut resipi khusus dari produk dengan penambahan sebatian organik dan bukan organik. Media sintetik mengandungi sebatian kimia tertentu dalam kepekatan yang diketahui.
Secara konsisten, media nutrien adalah cecair, separa cair, padat. Agar-agar-polisakarida yang diasingkan dari rumpai laut biasanya digunakan sebagai sealant. Agar-agar tidak digunakan oleh mikroorganisma sebagai nutrien; ia membentuk gel dalam air yang mencair pada suhu 100 ° C dan padat pada 45 ° C.
Untuk mendapatkan medium nutrien padat, agar-agar ditambahkan pada kepekatan 1.5-2%, untuk separa cair - 0,5%.
Mengikut tujuan yang dimaksudkan, media budaya dapat dibahagikan kepada diagnostik biasa (sederhana), khas, elektif, pembezaan.
Media nutrien konvensional (sederhana) digunakan untuk penanaman kebanyakan mikroorganisma, ini adalah mesopatamia broth (MPB), mesopatamia agar (MPA).
Media nutrien khas digunakan untuk penanaman mikroorganisma yang tidak tumbuh pada media sederhana. Contohnya, agar darah dan kaldu gula untuk streptokokus, agar serum untuk meningococcus dan gonococcus.
Media kultivatif elektif digunakan untuk mengasingkan satu spesies dari campuran bakteria yang berbeza. Bakteria jenis ini tumbuh di persekitaran ini lebih cepat dan lebih baik daripada yang lain, melebihi pertumbuhannya; pertumbuhan bakteria lain ditangguhkan pada medium ini. Contohnya, serum yang dibekukan untuk difteri bacillus, air peptone alkali untuk kolera vibrio, kaldu empedu untuk kepialu tifoid, media garam untuk staphylococcus.
Media kultur diagnostik pembezaan digunakan untuk membezakan beberapa jenis bakteria dengan yang lain berdasarkan aktiviti enzimatiknya (lihat bahagian yang sesuai).
Penanaman dan pengasingan kultur murni bakteria aerobik
Untuk penanaman mikroorganisma, syarat-syarat tertentu diperlukan: suhu, keadaan aerobik atau anaerobik.
Suhu mestilah optimum untuk spesies. Sebilangan besar bakteria patogen berkembang pada suhu 37 ° C. Walau bagaimanapun, untuk beberapa spesies, suhu yang lebih rendah adalah optimum, yang berkaitan dengan keunikan ekologi mereka. Oleh itu, untuk wabak bacillus, habitat semula jadi yang merupakan tikus semasa hibernasi, suhu optimum adalah 28 ° C, seperti untuk leptospira, untuk baculus botulisme - 28 ° C-35 ° C.
Sebagai tambahan kepada suhu optimum, untuk penanaman mikroorganisma, bergantung pada spesies, persekitaran aerobik atau anaerobik diperlukan.
Untuk mengkaji morfologi, budaya, biokimia dan sifat mikrob lain, perlu memperoleh budaya murni. Biasanya kultur mikroba disebut pengumpulannya pada medium nutrien dalam bentuk kekeruhan, pertumbuhan dekat-bawah (dinding), atau filem di permukaan medium cair atau koloni pada medium yang padat. Koloni tunggal terbentuk dari satu sel mikrob. Budaya murni adalah budaya mikrob spesies yang sama yang diperoleh dari satu koloni. Di makmal, strain mikrob tertentu yang diketahui digunakan untuk pelbagai kajian. Strain adalah kultur mikrob murni yang diperoleh dari sumber tertentu, pada masa tertentu, dengan sifat yang diketahui. Biasanya, strain mikroba ditentukan oleh nombor tertentu. Sebagai contoh, strain Staphylococcus aureus 209P digunakan untuk menentukan aktiviti penisilin.
Pengasingan kultur aerob murni biasanya memakan masa tiga hari dan dilakukan mengikut skema berikut:
Hari pertama - mikroskop smear dari bahan ujian, diwarnai (biasanya oleh Gram) - untuk kenalan awal dengan mikroflora, yang dapat berguna dalam memilih media kultur untuk inokulasi. Kemudian suntikan bahan di permukaan agar-agar nutrien beku untuk mendapatkan koloni terpencil. Menyaring boleh dilakukan mengikut kaedah Drygalsky menjadi tiga piring Petri dengan medium nutrien. Setetes bahan digunakan pada cawan pertama dan disebarkan ke seluruh cawan dengan spatula. Kemudian, dengan spatula yang sama, sebarkan budaya yang tinggal di atasnya pada cawan kedua dan dengan cara yang sama pada yang ketiga. Jumlah jajahan terbesar akan tumbuh di lempeng pertama, paling sedikit di ketiga. Koloni terpencil akan tumbuh di salah satu plat, bergantung pada berapa banyak sel mikrob dalam bahan ujian.
Hasil yang sama dapat dicapai dengan mengayak pada satu cawan. Untuk melakukan ini, bahagikan cawan menjadi empat sektor. Bahan yang dikaji diinokulasi dengan gelung bakteriologi dengan pukulan pada sektor pertama, kemudian, setelah dikalsinasi dan disejukkan gelung, inokulasi diedarkan dari sektor pertama ke sektor kedua dan dengan cara yang sama secara berurutan ke sektor ketiga dan keempat. Koloni terpencil terbentuk dari sel mikroba individu selepas inkubasi setiap hari dalam termostat.
Hari ke-2 - kajian mengenai tanah jajahan yang ditanam di atas pinggan, penerangannya. Koloni boleh menjadi lut sinar, lut sinar atau legap, ia mempunyai ukuran yang berbeza, garis bulat biasa atau tidak teratur, bentuk cembung atau rata, permukaan licin atau kasar, tepi licin atau bergelombang, bergerigi. Mereka boleh berwarna atau putih, emas, merah, kuning. Berdasarkan kajian ciri-ciri ini, koloni yang ditanam dibahagikan kepada beberapa kumpulan. Kemudian koloni terpencil dipilih dari kumpulan kajian, smear disediakan untuk pemeriksaan mikroskopik untuk memeriksa homogenitas mikroba di koloni. Koloni yang sama diinokulasi ke dalam tabung uji dengan agar-agar nutrien yang miring.
Hari ke-3 - memeriksa kesucian budaya yang ditanam pada agar-agar dengan mikroskop smear. Dengan homogenitas bakteria yang dikaji, pengasingan budaya murni dapat dianggap lengkap.
Untuk mengenal pasti bakteria terpencil, sifat budaya dikaji, iaitu sifat pertumbuhan pada media nutrien cair dan pepejal. Sebagai contoh, streptokokus pada kaldu gula membentuk sedimen bahagian bawah dan parietal, pada agar darah - kecil, menunjukkan koloni; kolera vibrio membentuk filem di permukaan air peptone alkali, dan koloni telus pada agar alkali; wabak wabak pada agar nutrien membentuk koloni dalam bentuk "sapu tangan renda" dengan pusat yang padat dan tepi bergelombang nipis, dan dalam medium nutrien cair - filem di permukaan, dan kemudian filamen memanjang darinya dalam bentuk "stalaktit ".
Penanaman dan pengasingan kultur murni bakteria anaerob
Untuk penanaman anaerob, perlu menurunkan potensi pengurangan oksidasi medium, untuk membuat anaerobiosis dengan mengeluarkan oksigen dengan kaedah fizikal, kimia atau biologi.
Kaedah fizikal merangkumi:
1) penyingkiran udara secara mekanikal melalui pam dari anae-rostat, di mana piring dengan inokulasi diletakkan. Pada masa yang sama, anda boleh mengganti udara dengan gas yang tidak peduli: nitrogen, hidrogen, karbon dioksida.
2) tumbuh dalam medium yang mengandungi zat pengurangan. Kitta-Tarozzi Wednesday adalah kaldu gula dengan potongan hati atau daging. Glukosa dan kepingan organ mempunyai keupayaan mengurangkan. Medium dituangkan di atas dengan lapisan minyak vaseline untuk menyekat akses oksigen udara.
3) Kaedah yang paling mudah, tetapi kurang dipercayai adalah menanam dalam gula agar tinggi.
Kaedah kimia terdiri daripada fakta bahawa piring dengan tanaman anaerob diletakkan di desiccator yang tertutup rapat, di mana bahan kimia diletakkan, misalnya, pyrogallol dan alkali, tindak balas di antaranya diteruskan dengan penyerapan oksigen.
Kaedah biologi didasarkan pada penanaman anaerob dan aerob secara serentak pada media nutrien pepejal dalam piring Petri, ditutup secara hermetik selepas inokulasi. Pertama, oksigen diserap oleh aerob yang tumbuh, dan kemudian pertumbuhan anaerob bermula.
Pengasingan budaya murni anaerob bermula dengan pengumpulan bakteria anaerob dengan inokulasi pada medium Kitta-Tarozzi. Di masa depan, koloni terpencil diperoleh dengan salah satu daripada dua cara:
1) bahan diinokulasi dengan mencampurkan dengan agar-agar gula cair dalam tiub kaca. Setelah agar menjadi padat, koloni terpencil tumbuh di kedalamannya, yang dikeluarkan dengan memotong tiub dan subkultur pada medium Kitt-Tarozzi (kaedah Weinberg);
2) inokulasi bahan dilakukan pada piring dengan medium nutrien dan diinkubasi dalam anaerostat. Jajahan terpencil yang ditanam di atas piring subkultur pada media Kitt-Tarozzi (kaedah Zeissler).
Penanaman mikroorganisma lain
Penanaman mikoplasma
Mycoplasma dikulturkan pada media nutrien yang dilengkapi dengan serum dan karbohidrat. Oleh kerana mikoplasma kekurangan dinding sel, mereka hanya tumbuh di lingkungan isotonik atau hipertonik. Pada media nutrien pepejal, selama beberapa hari, koloni sangat kecil terbentuk, menyerupai telur goreng - dengan pusat cembung dan pinggiran lut rata. Mycoplasmas juga dapat ditanam dalam embrio ayam atau kultur sel.
Penanaman rickettsia dan klamidia
Rickettsiae dan klamidia adalah parasit intraselular. Untuk penanamannya, kultur sel, embrio ayam dan jangkitan haiwan digunakan.
Penanaman cendawan
Untuk penanaman cendawan, media nutrien padat dan cair digunakan: selalunya media Sabouraud, serta media yang mengandungi bir wort. Cendawan tumbuh lebih perlahan daripada bakteria, ia membentuk pertumbuhan yang dapat dilihat dalam beberapa hari. Suhu penanaman lebih rendah daripada bakteria - 22-30 ° C.
Penanaman spirochetes dan protozoa
Di antara spirochetes, leptospira paling senang tumbuh, yang mana air yang dicampurkan dengan serum darah arnab dapat berfungsi sebagai medium nutrien.Borrelia dan treponema ditanam dalam keadaan anaerob pada media nutrien yang lebih kompleks yang mengandungi serum, kepingan tisu haiwan.
Antara protozoa, disentri amoeba, lamblia, Trichomonas, leishmania, trypanosome, balantidia ditanam pada media nutrien.Toksoplasma ditanam pada embrio ayam dan kultur tisu. Kaedah penanaman untuk plasmodia malaria sedang dikembangkan.
Kaedah untuk mengkaji aktiviti enzimatik (sifat biokimia)
Dalam praktik mikrobiologi, kajian aktiviti enzimatik digunakan untuk mengenal pasti mikroorganisma, kerana setiap spesies mikroba mempunyai sekumpulan enzim tertentu.
Untuk menentukan aktiviti proteolitik, mikroba diinokulasi dengan suntikan ke dalam gelatin gelen, dan setelah inkubasi 3-5 hari pada suhu bilik, watak pencairan gelatin diperhatikan: dalam bentuk corong, kuku, stoking atau dalam bentuk pokok Krismas yang terbalik. Kegiatan protein juga ditentukan oleh pembentukan produk penguraian protein: indole, hidrogen sulfida, ammonia. Untuk menentukannya, mikroorganisma diinokulasi ke dalam kaldu daging-peptone, dan kertas penunjuk diletakkan di antara leher tabung uji dan penyumbat kapas, tidak termasuk hubungannya dengan media. Apabila indole terbentuk, kertas yang diresapi dengan larutan tepu asid oksalik memperoleh warna merah jambu; di hadapan hidrogen sulfida, kertas yang diresapi dengan timbal asetat bertukar menjadi hitam; semasa amonia terbentuk, kertas litmus merah bertukar menjadi biru.
Untuk menentukan sifat sakarolitik mikroba, media diagnostik pembezaan digunakan, seperti media Giss, media Olkenitsky, medium Endo, medium Levin, medium Ploskirev.
Media Endo, Levin, Ploskirev dalam piring Petri digunakan untuk membezakan bakteria dari kumpulan usus dengan kemampuan mereka untuk fermentasi laktosa. Media ini mengandungi agar nutrien, laktosa dan petunjuk yang berubah warna dalam medium berasid - penunjuk pH. Sekiranya anda menyemai bakteria yang memfermentasi laktosa, seperti E. coli, di persekitaran seperti itu, asid akan terbentuk akibat penapaian laktosa, dan penunjuk akan berubah warna di persekitaran yang berasid. Oleh itu, koloni Escherichia coli pada media tersebut akan diwarnakan mengikut warna penunjuk: pada media Endo dan Ploskirev - berwarna merah, pada media Levin - dalam warna hitam dan biru. Koloni bakteria yang tidak fermentasi laktosa, seperti salmonella dan batang disentri, akan berwarna.
Media Giss ("variegated range" media) dibuat berdasarkan air peptone atau agar-peptone daging separa cair. Mengandungi salah satu alkohol karbohidrat atau polihidrat dan petunjuk. Apabila mikroba tumbuh di medium Giss, fermentasi substrat ini dengan pembentukan asid dan gas, medium akan berubah warna, dalam medium semi-cair, gelembung dan pecah akan muncul dalam ketebalan agar, dalam medium cair - a gelembung gas dalam pelampung kaca. Apabila substrat diperam hanya menjadi asid, hanya berlaku perubahan warna medium.
Media gabungan yang tidak mengandungi satu karbohidrat, tetapi dua atau tiga juga digunakan, sebagai contoh, media Olkenitsky. Satu tiub medium ini menggantikan agar slant dan media Giss dengan laktosa, glukosa dan sukrosa. Setelah pensterilan dalam keadaan lebur, medium dalam tabung uji dibongkarkan sehingga tiang dan bahagian serong diperoleh. Menyemai dilakukan dengan pukulan pada bahagian serong dan tusukan di lajur. Ketika laktosa atau sukrosa diperam, warna keseluruhan medium berubah; ketika satu glukosa ditapai, hanya warna lajur yang berubah. Pembentukan gas ditunjukkan oleh adanya gelembung di lajur agar. Apabila mikroba melepaskan amonia, warna medium tidak berubah. Pembentukan hidrogen sulfida ditunjukkan dengan menghitamkan dalam jadual agar
Untuk kaedah ekspres untuk menentukan aktiviti enzimatik bakteria, sistem microtest dan sistem kertas penunjuk (NIB) digunakan
Sistem microtest adalah bekas yang terbuat dari polistirena lutsinar, yang terdiri daripada beberapa sel. Sel mengandungi media nutrien kering dengan karbohidrat dan penunjuk pH. Suspensi kultur bakteria dengan ketumpatan tertentu diinokulasi ke dalam setiap sel.
penunjuk
Sistem kertas petunjuk (NIB) untuk pengenalpastian keluarga enterobacteriaceae adalah cakera atau helai kertas kromatografi, ditutup dengan filem pelindung dan mengandungi substrat tertentu dan penunjuk. Dengan mengubah warna penunjuk Untuk menentukan hidrogen sulfida, cakera adalah diletakkan di permukaan MPA, disuntik dengan suntikan, yang membolehkan anda menentukan pergerakan secara serentak
Dalam semua tabung, hasil awal pada hari yang sama dan hasil akhir pada hari berikutnya diambil kira.
Aktiviti oksidase ditentukan dengan mengisar kultur pada kertas petunjuk.Hasilnya diambil kira setelah satu minit.
Mikroorganisma (kecuali parasit intraselular wajib - rickettsia, klamidia, virus dan protozoa) biasanya ditanam pada media nutrien buatan. Bergantung pada keperluan pemakanan satu atau lain jenis media nutrien harus mengandungi bahan awal yang sesuai yang diperlukan untuk metabolisme plastik dan tenaga.
Pengasingan mikroorganisma dari pelbagai bahan dan pengeluaran kulturnya digunakan secara meluas dalam praktik makmal untuk diagnostik mikrobiologi penyakit berjangkit, dalam kerja penyelidikan dan pengeluaran mikrobiologi vaksin, antibiotik dan produk aktif biologi aktiviti vital mikrob yang lain.
Keadaan penanaman juga bergantung pada sifat mikroorganisma masing-masing. Sebilangan besar mikrob patogen ditanam pada media nutrien pada suhu 37 ° C selama 12 hari. Namun, sebilangannya memerlukan masa yang lebih lama. Contohnya, bakteria batuk rejan - dalam 2-3 hari, dan mycobacterium tuberculosis - dalam 3-4 minggu.
Untuk merangsang proses pertumbuhan dan pembiakan mikrob aerobik, dan juga untuk mengurangi waktu penanamannya, metode penanaman terendam digunakan, yang terdiri dari pengudaraan dan pengadukan media nutrien secara berterusan. Kaedah mendalam telah mendapat banyak aplikasi dalam bioteknologi.
Untuk penanaman anaerob, kaedah khas digunakan, intinya adalah untuk membuang udara atau menggantinya dengan gas lengai dalam termostat tertutup - anaerostat. Anaerob ditanam pada media nutrien yang mengandungi zat pengurangan (glukosa, natrium format, dll.) Yang mengurangkan potensi redoks.
Dalam praktik diagnostik, kultur bakteria tulen sangat penting, yang diasingkan dari bahan ujian yang diambil dari pesakit atau objek persekitaran. Untuk tujuan ini, media nutrien buatan digunakan, yang dibahagikan kepada media diagnostik dan elektif asas, komposisi yang paling pelbagai. Pemilihan medium nutrien untuk pengasingan budaya murni sangat penting untuk diagnostik bakteriologi.
Dalam kebanyakan kes, media kultur padat digunakan, yang sebelumnya dituangkan ke dalam piring Petri. Bahan ujian diletakkan di permukaan medium dalam satu gelung dan dikurangkan dengan spatula untuk mendapatkan koloni terpencil yang tumbuh dari satu sel. Subkultur koloni terpencil ke agar miring dalam tabung uji menghasilkan kultur murni.
Untuk pengenalan diri, i.e. menentukan generik dan spesies kepunyaan budaya yang dipilih, selalunya ciri fenotipik dikaji:
a) morfologi sel bakteria dalam noda atau sediaan asli;
b) tanda-tanda budaya biokimia sesuai dengan kemampuannya untuk fermentasi karbohidrat (glukosa, laktosa, sukrosa, maltosa, manitol, dll.), untuk membentuk indol, amonia dan hidrogen sulfida, yang merupakan produk aktiviti proteolitik bakteria.
Untuk analisis yang lebih lengkap, kromatografi gas-cecair dan kaedah lain digunakan.
Bersama dengan kaedah bakteriologi untuk mengenal pasti budaya murni, kaedah penyelidikan imunologi digunakan secara meluas, yang bertujuan untuk mengkaji struktur antigenik budaya terpencil. Untuk tujuan ini, reaksi serologi digunakan: aglutinasi, pengendapan imunofluoresensi, pengikatan pelengkap, enzim immunoassay, kaedah radioimmunoassay, dll.
-
Kaedah untuk mengasingkan budaya murni
Untuk mengasingkan budaya mikroorganisma yang murni, perlu memisahkan banyak bakteria yang ada di dalam bahan tersebut, satu dari yang lain. Ini dapat dicapai dengan kaedah yang berdasarkan dua prinsip -mekanikal danbiologi pemisahan bakteria.
Kaedah untuk pengasingan budaya murni berdasarkan prinsip mekanik
Kaedah pencairan bersiri, yang diusulkan oleh L. Pasteur, adalah salah satu yang pertama, yang digunakan untuk pemisahan mekanikal mikroorganisma. Ini terdiri dalam melakukan pengenceran bersiri dari bahan yang mengandungi mikrob dalam keadaan sterilcecairmedium nutrien. Teknik ini agak susah payah dan tidak sempurna dalam pekerjaan, kerana tidak memungkinkan anda mengawal bilangan sel mikroba yang memasuki tabung uji semasa pencairan.
Ia tidak mempunyai keburukan iniKaedah Koch (kaedah pencairan plat). R. Koch menggunakan media nutrien pepejal berdasarkan gelatin atau agar-agar. Bahan dengan pelbagai jenis bakteria diencerkan dalam beberapa tabung uji dengan gelatin cair dan sedikit sejuk, kandungannya kemudian dituangkan ke dalam piring kaca steril. Setelah gelasi medium, ia ditanam pada suhu optimum. Koloni mikroorganisma terpencil terbentuk dalam ketebalannya, yang dapat dengan mudah dipindahkan ke medium nutrien segar menggunakan gelung platinum untuk mendapatkan kultur bakteria murni.
Kaedah Drygalskiadalah kaedah yang lebih maju yang banyak digunakan dalam amalan mikrobiologi setiap hari. Pertama, bahan ujian digunakan pada permukaan medium dalam piring Petri dengan pipet atau gelung. Dengan menggunakan spatula logam atau kaca, gosokkannya dengan teliti ke dalam medium. Pinggan tetap dibuka semasa penyemaian dan dipusingkan secara perlahan untuk mengedarkan bahan secara merata. Tanpa mensterilkan spatula, mereka membawa bahan yang dipinjam ke dalam piring Petri lain, jika perlu, pada sepertiga. Barulah spatula dicelupkan ke dalam larutan pembasmi kuman atau digoreng dalam api pembakar. Di permukaan media, pada hidangan pertama, kita memerhatikan, sebagai peraturan, pertumbuhan bakteria berterusan, pada pertumbuhan kedua - padat, dan pada ketiga - pertumbuhan dalam bentuk koloni terpencil.
Koloni kaedah Drigalski
Kaedah budaya garishari ini ia paling kerap digunakan di makmal mikrobiologi. Bahan yang mengandungi mikroorganisma dikumpulkan dengan gelung bakteriologi dan digunakan pada permukaan medium kultur berhampiran tepi pinggan. Keluarkan lebihan bahan dan tahan dengan pukulan selari dari tepi ke tepi cawan. Setelah seharian inkubasi pada suhu optimum, koloni mikroba terpencil tumbuh di permukaan pinggan.
Kaedah pukulan
Untuk mendapatkan koloni terpencil, anda boleh menggunakan swab tertutup, yang digunakan untuk mengumpulkan bahan ujian. Buka piring Petri dengan medium nutrien sedikit, masukkan tampon ke dalamnya dan gosokkan bahan ke permukaan pinggan dengan gerakan yang berhati-hati, secara beransur-ansur mengembalikan tampon dan pinggan.
Oleh itu, kelebihan ketara kaedah koch, Drygalsky dan kaedah pelarasan pelarutan plat ialah mereka mencipta koloni mikroorganisma terpencil, yang, apabila diinokulasi ke medium nutrien lain, berubah menjadi budaya murni.
Kaedah biologi untuk mengasingkan budaya murni
Prinsip biologi pemisahan bakteria menyediakan kaedah pencarian kaedah yang mengambil kira banyak ciri sel mikroba. Antara kaedah yang paling biasa adalah seperti berikut:
1. Mengikut jenis pernafasan. Semua mikroorganisma mengikut jenis pernafasan dibahagikan kepada dua kumpulan utama:aerobik (Corynebacterium diphtheriaeVibrio сholerae dan lain-lain) dananaerobik (Clostridium tetaniClostridium botulinumClostridium perfringens dan lain-lain)... Sekiranya bahan dari mana patogen anaerobik harus diasingkan terlebih dahulu dipanaskan dan kemudian dibiakkan dalam keadaan anaerobik, maka bakteria ini akan tumbuh.
2. Olehsporulasi. Telah diketahui bahawa sebilangan mikroba (bacilli dan clostridia) mampu kesuburan. AntaranyaClostridium tetaniClostridium botulinumClostridium perfringensBacillus subtilisBacillus cereus... Pertikaian tahan terhadap faktor persekitaran. Akibatnya, bahan ujian boleh dikenakan tindakan faktor terma, dan kemudian dipindahkan secara inokulatif ke dalam medium nutrien. Setelah beberapa lama, bakteria yang mampu kesuburan akan tumbuh di atasnya.
3. Ketahanan mikroba terhadap asid dan alkali. Sebilangan kuman(Mycobacterium tuberculosisMycobacterium bovis) sebagai hasil dari keunikan struktur kimianya, mereka tahan terhadap tindakan asid. Itulah sebabnya mengapa bahan yang mengandunginya, misalnya, dahak dalam tuberkulosis, diolah dengan jumlah larutan asid sulfurik 10% yang sama, dan kemudian disemai pada media nutrien. Flora ekstremus mati, dan mikobakteria, akibat ketahanannya terhadap asid, tumbuh.
Vibrio kolera(Vibrio сholerae)sebaliknya, ia adalah bakteria halofilik, oleh itu, untuk mewujudkan keadaan pertumbuhan yang optimum, ia disemai pada media yang mengandungi alkali (1% air peptone alkali). Dalam masa 4-6 jam, tanda-tanda pertumbuhan khas muncul di permukaan medium dalam bentuk filem kebiruan halus.
4. Mobiliti bakteria. Sebilangan kuman(Proteus vulgaris) mempunyai kecenderungan untuk merayap dan dapat dengan cepat tersebar di permukaan sesuatu yang lembap. Untuk mengasingkan patogen tersebut, mereka diinokulasi ke dalam titisan cairan pemeluwapan, yang terbentuk ketika agar-agar disejukkan. Setelah 16-18 tahun, mereka merebak ke seluruh permukaan persekitaran. Sekiranya kita mengambil bahan dari bahagian atas agar, kita akan mempunyai kultur patogen yang murni.
5. Kepekaan mikroba terhadap tindakan bahan kimia, antibiotik dan agen antimikroba lain.Hasil daripada ciri metabolisme bakteria, mereka dapat mempunyai kepekaan yang berbeza terhadap faktor kimia tertentu. Telah diketahui bahawa staphylococci, basil aerobik yang membentuk spora, tahan terhadap tindakan natrium klorida 7.5-10%. Itulah sebabnya untuk pengasingan patogen ini, media nutrien elektif (agar-garam garam, agar-agar garam agar) digunakan, yang mengandungi zat ini. Bakteria lain secara praktikal tidak tumbuh pada kepekatan natrium klorida ini.
6. Pentadbiran sebilangan antibiotik(nystatin) digunakan untuk menghalang pertumbuhan kulat pada bahan yang sangat terkontaminasi dengannya. Sebaliknya, penambahan penisilin antibiotik ke medium mendorong pertumbuhan flora bakteria sekiranya kulat diasingkan. Penambahan furazolidon pada kepekatan tertentu ke medium nutrien mewujudkan keadaan selektif untuk pertumbuhan corynebacteria dan mikrokocci.
7. Keupayaan mikroorganisma menembusi kulit yang utuh. Beberapa bakteria patogen(Yersinia pestis) hasil daripada kehadiran sebilangan besar enzim pencerobohan, mereka dapat menembusi kulit yang utuh. Untuk ini, rambut di badan haiwan makmal dicukur dan bahan ujian digosok ke kawasan ini, yang mengandungi patogen dan sejumlah besar mikroflora pihak ketiga. Selepas beberapa ketika, haiwan itu disembelih, dan mikroba dilepaskan dari darah atau organ dalaman.
8. Kepekaan haiwan makmal terhadap agen berjangkit.Beberapa haiwan sangat sensitif terhadap pelbagai mikroorganisma.
Contohnya, dengan mana-mana laluan pentadbiranStreptococcus pneumoniaetikus putih mengalami jangkitan pneumokokus secara umum. Gambaran serupa diperhatikan ketika babi guinea dijangkiti patogen tuberkulosis.(Mycobacterium tuberculosis).
Dalam amalan seharian, ahli bakteriologi menggunakan konsep sepertiketegangandanbudaya murnimikroorganisma. Strain difahami bermaksud mikroba dari spesies yang sama, yang diasingkan dari sumber yang berlainan, atau dari sumber yang sama, tetapi pada masa yang berlainan. Budaya bakteria tulen adalah mikroorganisma dari spesies yang sama, keturunan dari satu sel mikroba, yang tumbuh pada media nutrien.
Pengasingan budaya murni aerobny mikroorganisma terdiri daripada beberapa peringkat.
Hari pertama(Penyelidikan Tahap 1) bahan patologi dibawa ke dalam bekas steril (tabung uji, termos, botol). Mereka mempelajarinya - rupa, tekstur, warna, bau dan tanda-tanda lain, menyiapkan smear, melukis dan memeriksanya di bawah mikroskop. Dalam beberapa kes (gonore akut, wabak), diagnosis awal dapat dibuat pada tahap ini, dan di samping itu, adalah mungkin untuk memilih media di mana bahan akan diinokulasi. Kemudian mereka melakukan gelung bakteriologi (paling sering digunakan), dengan bantuan spatula - dengan kaedah Drygalsky, dengan kain kapas-kain kasa. Cawan ditutup, terbalik, ditandatangani dengan pensil khas dan diletakkan di termostat pada suhu optimum (37 ° C) selama 18-48 jam. Matlamat peringkat ini adalah untuk mendapatkan koloni mikroorganisma terpencil.
Walau bagaimanapun, kadang-kadang untuk menumpuk bahan, disemai pada media nutrien cair.
Pada hari kedua(Penyelidikan Tahap 2) di permukaan medium nutrien padat, mikroorganisma membentuk pertumbuhan berterusan, padat atau koloni terpencil.Tanah jajahan - Ini adalah pengumpulan bakteria yang dapat dilihat oleh mata kasar di permukaan atau ketebalan medium nutrien. Sebagai peraturan, setiap koloni terbentuk dari keturunan satu sel mikroba (klon), oleh itu komposisi mereka cukup homogen. Ciri-ciri pertumbuhan bakteria pada media nutrien adalah manifestasi sifat budaya mereka.
Plat diteliti dan diperiksa untuk kawasan jajahan terpencil yang tumbuh di permukaan agar. Perhatikan ukuran, bentuk, warna, sifat tepi dan permukaan koloni, konsistensi dan ciri-ciri lain. Sekiranya perlu, periksa koloni di bawah kaca pembesar, mikroskop pembesaran rendah atau tinggi. Struktur koloni diperiksa dalam cahaya yang dipancarkan pada pembesaran mikroskop rendah. Mereka boleh berbentuk hyaline, granular, filamen atau berserat, yang dicirikan oleh kehadiran benang yang saling terkait dalam ketebalan koloni.
Pencirian koloni adalah bahagian penting dalam kerja ahli bakteriologi dan pembantu makmal, kerana mikroorganisma setiap spesies mempunyai koloni khas mereka sendiri.
Pada hari ketiga(Penyelidikan Tahap 3) mengkaji sifat pertumbuhan budaya mikroorganisma tulen dan menjalankan pengenalpastiannya.
Pertama, mereka memperhatikan keanehan pertumbuhan mikroorganisma pada media dan membuat smear, mengotorkannya dengan kaedah Gram, untuk memeriksa budaya kesucian. Sekiranya bakteria dengan jenis morfologi, ukuran dan sifat tinctorial yang sama (kemampuan untuk melukis) diperhatikan di bawah mikroskop, dapat disimpulkan bahawa kulturnya murni. Dalam beberapa kes, yang sudah kelihatan dan ciri-ciri pertumbuhannya, adalah mungkin untuk membuat kesimpulan mengenai jenis patogen yang diasingkan. Menentukan jenis bakteria dengan ciri morfologi mereka disebut identifikasi morfologi.Menentukan jenis patogen dengan ciri budaya mereka disebut identifikasi budaya.
Walau bagaimanapun, kajian ini tidak cukup untuk membuat kesimpulan akhir mengenai jenis mikroba terpencil. Oleh itu, mereka mengkaji sifat biokimia bakteria. Mereka cukup pelbagai.
-
Pengenalpastian bakteria.
Penentuan jenis patogen oleh sifat biokimia disebut pengenalan biokimia.
Untuk menentukan spesies bakteria, struktur antigeniknya sering dikaji, yaitu, mereka dikenal pasti oleh sifat antigenik. Setiap mikroorganisma mengandungi bahan antigenik yang berbeza. Khususnya, wakil keluarga enterobacteriaceae (Yesherichia, Salmoneli, Shigela) mengandungi membran O-antigen, flagellate H-antigen dan K-antigen kapsul. Mereka heterogen dalam komposisi kimianya, oleh itu ia terdapat dalam banyak varian. Mereka dapat ditentukan dengan menggunakan sera aglutinasi tertentu. Definisi jenis bakteria ini disebut pengenalpastian serologi.
Kadang kala bakteria dikenal pasti dengan menjangkiti haiwan makmal dengan kultur murni dan memerhatikan perubahan yang disebabkan oleh patogen dalam tubuh (tuberkulosis, botulisme, tetanus, salmonellosis, dll.). Kaedah ini dipanggil pengenalpastian oleh sifat biologi... Sebagai objek - babi guinea, tikus putih dan tikus paling kerap digunakan.
LAMPIRAN
(jadual dan rajah)
Fisiologi bakteria
Skema 1. Fisiologi bakteria.
pemakanan
nafas
ketinggian
pembiakan semula
tumbuh pada media nutrien
Jadual 1. Jadual umum fisiologi bakteria.
|
№ |
Konsep |
Ciri |
|
Pemakanan |
Proses memperoleh tenaga dan zat. |
|
|
Nafas |
Satu set proses biokimia, akibatnya tenaga yang diperlukan untuk aktiviti penting sel mikroba dilepaskan. |
|
|
Ketinggian |
Pembiakan selaras dari semua komponen dan struktur sel, yang akhirnya menyebabkan peningkatan jisim sel |
|
|
Pembiakan |
Peningkatan bilangan sel dalam populasi |
|
|
Tumbuh pada media nutrien. |
Dalam keadaan makmal, mikroorganisma ditanam pada media nutrien yang mesti steril, telus, lembab, mengandungi nutrien tertentu (protein, karbohidrat, vitamin, unsur surih, dll.), Mempunyai daya penyangga tertentu, memiliki pH yang sesuai, potensi redoks. |
Jadual 1.1 Komposisi kimia dan fungsi fisiologi unsur-unsur.
|
№ |
Elemen gubahan |
Ciri dan peranan dalam fisiologi sel. |
|
|
Air |
Komponen utama sel bakteria, menyumbang kira-kira 80% jisimnya. Ia berada dalam keadaan bebas atau terikat dengan unsur-unsur struktur sel. Dalam pertikaian, jumlah air dikurangkan menjadi 18.20%. Air adalah pelarut bagi banyak bahan dan juga memainkan peranan mekanikal dalam menyediakan turgor. Semasa plasmolisis - kehilangan air oleh sel dalam larutan hipertonik - protoplasma terlepas dari membran sel. Mengeluarkan air dari kandang, mengeringkan menghentikan proses metabolik. Sebilangan besar mikroorganisma bertolak ansur dengan pengeringan dengan baik. Dengan kekurangan air, mikroorganisma tidak membiak. Pengeringan dalam vakum dari keadaan beku (lyophilization) menghentikan pembiakan dan mendorong pemeliharaan jangka panjang individu mikroba. |
||
|
Protein |
40 - 80% bahan kering. Mereka menentukan sifat biologi bakteria yang paling penting dan biasanya terdiri daripada gabungan 20 asid amino. Bakteria termasuk asid diaminopimelic (DAP), yang tidak ada pada sel manusia dan haiwan. Bakteria mengandungi lebih daripada 2000 protein berbeza yang terdapat dalam komponen struktur dan terlibat dalam proses metabolik. Sebilangan besar protein mempunyai aktiviti enzimatik.Protein sel bakteria menentukan antigenisitas dan imunogenisitas, virulensi, dan spesies bakteria. |
||
|
№ |
Elemen gubahan |
Ciri dan peranan dalam fisiologi sel. |
|
|
Asid nukleik |
Mereka melakukan fungsi yang serupa dengan asid nukleik sel eukariotik: molekul DNA dalam bentuk kromosom bertanggungjawab untuk keturunan, asid ribonukleik (maklumat, atau matriks, pengangkutan dan ribosom) terlibat dalam biosintesis protein. |
||
|
Karbohidrat |
Mereka diwakili oleh bahan sederhana (mono- dan disakarida) dan sebatian kompleks. Polisakarida sering dijumpai dalam kapsul. Beberapa polisakarida intraselular (kanji, glikogen, dan lain-lain) adalah nutrien simpanan. |
||
|
Lipid |
Mereka adalah bahagian dari membran sitoplasma dan turunannya, serta dinding sel bakteria, misalnya, membran luar, di mana, selain lapisan lipid biomolekul, terdapat LPS. Lipid boleh memainkan peranan nutrien simpanan dalam sitoplasma. Lipid bakteria diwakili oleh fosfolipid, asid lemak dan gliserida. Mycobacterium tuberculosis mengandungi jumlah lipid terbesar (sehingga 40%). |
||
|
Mineral |
Ia dijumpai dalam abu setelah sel dibakar. Fosfor, kalium, natrium, sulfur, besi, kalsium, magnesium, serta unsur surih (zink, tembaga, kobalt, barium, mangan, dll.) Dikesan dalam jumlah besar. Mereka terlibat dalam pengaturan tekanan osmotik, pH dari medium, potensi redoks, mengaktifkan enzim, adalah sebahagian daripada enzim, vitamin dan komponen struktur sel mikroba. |
||
Jadual 1.2. Asas nitrogen.
|
№ |
Asas nitrogen |
Ciri |
Catatan |
|
Purine |
Adenine, Guanine |
Komposisi nukleotida: deoksiribosa, asas nitrogen - adenin, guanin, sitosin, timin, residu H3PO4. Pelengkap asas nitrogen A = T, G = C. Heliks berganda. Mampu menggandakan diri |
|
|
Pyrimidine |
Cytosine, Timin atau Uracil (untuk RNA dan bukannya Timin) |
Jadual 1.2.1 Enzim
|
№ |
Tanda |
Ciri |
|
|
Definisi |
Pemangkin protein khusus dan berkesan terdapat di semua sel hidup. |
||
|
Fungsi |
Enzim mengurangkan tenaga pengaktifan, memberikan berlakunya tindak balas kimia yang, tanpa mereka, hanya boleh berlaku pada suhu tinggi, tekanan berlebihan dan dalam keadaan bukan fisiologi lain yang tidak dapat diterima oleh sel hidup. |
||
|
Enzim meningkatkan kadar tindak balas dengan kira-kira 10 pesanan magnitud, yang mengurangkan jangka hayat tindak balas dari 300 tahun hingga satu saat. |
|||
|
Enzim "mengenali" substrat oleh susunan spasial molekulnya dan pengedaran cas di dalamnya. Bahagian molekul protein enzimatik - pusat pemangkinnya - bertanggungjawab untuk mengikat substrat. Dalam kes ini, kompleks enzim-substrat menengah terbentuk, yang kemudiannya terurai dengan pembentukan produk reaksi dan enzim bebas. |
|||
|
Varieti |
Enzim pengatur (allosteric) melihat pelbagai isyarat metabolik dan, sesuai dengan itu, mengubah aktiviti pemangkinnya. |
Enzim efaktor - enzim yang menjadi pemangkin reaksi tertentu (untuk lebih jelasnya, lihat Jadual 1.2.2.) |
|
|
Aktiviti yang berfungsi |
Kegiatan fungsi enzim dan kadar reaksi enzimatik bergantung pada keadaan di mana mikroorganisma berada dan, pertama sekali, pada suhu medium dan pHnya. Bagi banyak mikroorganisma patogen, suhu optimum ialah 37 ° C dan pH 7.2-7.4. |
||
KELAS ENZYME:
-
mikroorganisma mensintesis pelbagai enzim yang tergolong dalam keenam kelas yang diketahui.
Jadual 1.2.2. Kelas enzim penguat
|
№ |
Kelas enzim |
Memangkin: |
|
Oxidoreductase |
Pemindahan elektron |
|
|
Transferases |
Pemindahan pelbagai kumpulan kimia |
|
|
Hidrolase |
Pemindahan kumpulan berfungsi ke molekul air |
|
|
Lases |
Lampiran kumpulan pada ikatan berganda dan tindak balas terbalik |
|
|
Isomerase |
Pemindahan kumpulan dalam molekul dengan pembentukan bentuk isomer |
|
|
Ligase |
Pembentukan ikatan C-C, C-S, C-O, C-N kerana tindak balas pemeluwapan yang berkaitan dengan penguraian adenosin trifosfat (ATP) |
Jadual 1.2.3. Jenis enzim dengan pembentukan dalam sel bakteria
|
№ |
Jenis |
Ciri |
Catatan (sunting) |
|
Iiducible (adaptif) enzim "Aruhan substrat" |
|
||
|
Enzim penindasan |
Sintesis enzim ini ditekan akibat pengumpulan berlebihan produk reaksi yang dikatalisis oleh enzim ini. |
Contoh penindasan enzim adalah sintesis triptofan, yang terbentuk daripada asid antranilik dengan penyertaan sintetase antranilat. |
|
|
Enzim konstitutif |
Enzim disintesis tanpa mengira keadaan persekitaran |
Enzim glikolisis |
|
|
Kompleks multienzim |
Enzim intraselular digabungkan secara struktural dan berfungsi |
Enzim rantai pernafasan dilokalisasikan pada membran sitoplasma. |
Jadual 1.2.4. Enzim tertentu
|
№ |
Enzim |
Pengenalpastian bakteria |
|
Superoxide dismutase dan catalase |
Semua aerob atau anaerob fakultatif mempunyai superoksida dismutase dan katalase - enzim yang melindungi sel daripada produk toksik metabolisme oksigen. Hampir semua anaerob wajib tidak mensintesis enzim ini. Hanya satu kumpulan bakteria aerobik - bakteria asid laktik yang negatif katalase. |
|
|
Peroksidase |
Bakteria asid laktik mengumpulkan peroksidase, enzim yang menjadi pemangkin pengoksidaan sebatian organik di bawah tindakan H2O2 (dikurangkan menjadi air). |
|
|
Arginine dihydrolase |
Ciri diagnostik yang memungkinkan untuk membezakan spesies Pseudomonas saprophytic dari spesies fitopatogenik. |
|
|
Ureaza |
Di antara lima kumpulan utama keluarga Enterobacteriaceae, hanya dua - Escherichiae dan Erwiniae - yang tidak mensintesis urease. |
Jadual 1.2.5. Penerapan enzim bakteria dalam mikrobiologi industri.
|
№ |
Enzim |
Permohonan |
|
Amilase, selulase, protease, lipase |
Untuk meningkatkan pencernaan, persiapan enzim siap pakai digunakan untuk memudahkan hidrolisis pati, selulosa, protein dan lipid. |
|
|
Invertase yis |
Dalam pembuatan gula-gula untuk mengelakkan penghabluran sukrosa |
|
|
Pektinase |
Digunakan untuk menjelaskan jus buah |
|
|
Kolagenase clostridium dan streptokinase streptococci |
Menghidrolisis protein, mendorong penyembuhan luka dan luka bakar |
|
|
Enzim bakteria litik |
Mereka dirembeskan ke dalam lingkungan, bertindak pada dinding sel mikroorganisma patogen dan berfungsi sebagai cara yang efektif dalam memerangi yang terakhir, walaupun mereka mempunyai banyak ketahanan terhadap antibiotik |
|
|
Ribonucleases, deoxyribonucleases, polymerases, DNA ligases dan enzim lain yang secara khusus mengubah asid nukleik |
Digunakan sebagai alat dalam kimia bioorganik, kejuruteraan genetik dan terapi gen |
Jadual 1.2.6. Pengelasan enzim mengikut lokalisasi.
|
№ |
Kelas |
Penyetempatan |
Fungsi |
|
Endozim |
|
Mereka hanya berfungsi di dalam sel. Mereka memangkinkan reaksi biosintesis dan metabolisme tenaga. |
|
|
Exozim |
Dibebaskan ke persekitaran. |
Mereka dibebaskan oleh sel ke dalam lingkungan dan menjadi pemangkin reaksi hidrolisis sebatian organik kompleks kepada yang lebih sederhana yang tersedia untuk asimilasi oleh sel mikroba. Ini termasuk enzim hidrolitik, yang memainkan peranan yang sangat penting dalam pemakanan mikroorganisma. |
Jadual 1.2.7.Enzim mikrob patogen (enzim pencerobohan)
|
№ |
Enzim |
Fungsi |
Pembentukan enzim tertentu di makmal |
|
Lecitovitellase = lesitinase |
Menghancurkan membran sel |
|
|
|
Hemolysin |
Menghancurkan sel darah merah |
|
|
|
Budaya positif koagulase |
Menyebabkan pembekuan plasma darah |
|
|
|
Kultur negatif koagulase |
Pengeluaran manitol |
|
|
|
№ |
Enzim |
Fungsi |
Pembentukan enzim tertentu di makmal |
|
Hyaluronidase |
Hydrolyzes hyaluronic acid - komponen utama tisu penghubung |
|
|
|
Neuraminidase |
Ia membersihkan asid sialik (neuraminik) dari pelbagai glikoprotein, glikolipid, polisakarida, meningkatkan kebolehtelapan pelbagai tisu. |
Pengesanan: reaksi untuk penentuan antibodi terhadap neuraminidase (RINA) dan lain-lain (kaedah immunodiffusion, immunoenzymatic dan radioimmune). |
Jadual 1.2.8. Pengelasan enzim dengan sifat biokimia.
|
№ |
Enzim |
Fungsi |
Pengesanan |
|
Sugarolytic |
Pecahan gula |
Pembezaan - persekitaran diagnostik seperti persekitaran Giss, persekitaran Olkenitsky, persekitaran Endo, persekitaran Levin, persekitaran Ploskirev. |
|
|
Proteolitik |
Pecahan protein |
Mikroba diinokulasi dengan suntikan ke dalam gelatin gelatin, dan setelah inkubasi 3-5 hari pada suhu bilik, watak pencairan gelatin diperhatikan. Kegiatan protein juga ditentukan oleh pembentukan produk penguraian protein: indole, hidrogen sulfida, ammonia. Untuk menentukannya, mikroorganisma diinokulasi ke dalam sup peptone daging. |
|
|
Enzim produk akhir |
|
Untuk membezakan beberapa jenis bakteria dengan yang lain berdasarkan aktiviti enzimatiknya, ia digunakanpersekitaran diagnostik pembezaan |
Skim 1.2.8. Komposisi enzim.
KOMPOSISI ENZYMIK SETIAP MIKROORGANISME:
Ditakrifkan oleh genomnya
Adalah tanda yang stabil
Digunakan secara meluas untuk mengenal pasti mereka
Penentuan sifat sakarolitik, proteolitik dan lain-lain.
Jadual 1.3. Pigmen
|
№ |
Pigmen |
Sintesis mikroorganisma |
|
Pigmen karotenoid larut lemak berwarna merah, oren atau kuning |
Mereka membentuk sarcin, mycobacterium tuberculosis, beberapa actinomycetes. Pigmen ini melindungi mereka dari sinaran UV. |
|
|
Pigmen hitam atau coklat - melanin |
Disintesis oleh wajib anaerob Bacteroides niger dan lain-lain, tidak larut dalam air dan juga asid kuat |
|
|
Pigrole pigmen merah terang - prodigiosin |
Dibentuk oleh beberapa serasi |
|
|
Pigmen fenosin larut dalam air - pyocyanin. |
Dihasilkan oleh bakteria Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa). Dalam kes ini, medium kultur dengan pH neutral atau alkali bertukar menjadi biru-hijau. |
Jadual 1.4. Mikroorganisma yang bercahaya dan membentuk aroma
|
№ |
Fenomena |
Keadaan dan ciri |
|
Cahaya (cahaya) |
Bakteria menyebabkan pencahayaan substrat tersebut, misalnya, sisik ikan, jamur yang lebih tinggi, pokok busuk, produk makanan, di permukaan yang mana mereka membiak.Sebilangan besar bakteria bercahaya adalah spesies halofilik yang dapat membiak pada kepekatan garam yang tinggi. Mereka tinggal di laut dan lautan dan jarang di badan air tawar. Semua bakteria bercahaya adalah aerobik. Mekanisme pencahayaan dikaitkan dengan pembebasan tenaga semasa pengoksidaan biologi substrat. |
|
|
Pembentukan aroma |
Sebilangan mikroorganisma menghasilkan zat aroma mudah menguap, seperti etil asetat dan amil asetat, yang memberikan aroma kepada wain, bir, asid laktik dan produk makanan lain, dan oleh itu digunakan dalam pengeluarannya. |
Jadual 2.1.1 Metabolisme
|
№ |
Konsep |
Definisi |
|
|
Metabolisme |
Proses biokimia dalam sel disatukan dengan satu perkataan - metabolisme (metabole Yunani - transformasi). Istilah ini bersamaan dengan konsep "metabolisme dan tenaga". Terdapat dua aspek metabolisme: anabolisme dan katabolisme. |
||
|
|
||
|
Amfibolisme |
Metabolisme perantaraan, yang mengubah pecahan nutrien dengan berat molekul rendah menjadi sebilangan asid organik dan ester fosforik, disebut |
||
Skema 2.1.1. Metabolisme
METABOLISME -
satu set dua proses yang berlawanan, tetapi saling berinteraksi: katabolisme dan anabolisme
dengan
Anabolisme= asimilasi = metabolisme plastik = metabolisme konstruktif
Katabolisme= penyebaran = metabolisme tenaga = pereputan = membekalkan sel dengan tenaga
Sintesis (komponen sel)
Reaksi katabolik enzim yang mengakibatkan pembebasan tenaga, yang telah terkumpul dalam molekul ATP.
Biosintesis monomer:
nukleotida asid amino monosakarida asid lemak
Biosintesis polimer:
protein asid nukleik, polisakarida lipid
Hasil daripada reaksi anabolik enzimatik, tenaga yang dikeluarkan dalam proses katabolisme dihabiskan untuk sintesis makromolekul sebatian organik, dari mana biopolimer kemudiannya dipasang - bahagian penyusun sel mikroba.
Tenaga dibelanjakan untuk sintesis komponen sel
Jadual 2.1.3. Metabolisme dan transformasi tenaga sel.
|
№ |
Metabolisme |
Ciri |
Catatan (sunting) |
|
Fungsi |
Metabolisme memberikan keseimbangan dinamik yang wujud dalam organisma hidup sebagai sistem, di mana sintesis dan pemusnahan, pembiakan dan kematian saling seimbang. |
Metabolisme adalah tanda utama kehidupan |
|
|
Pertukaran plastik Sintesis protein, lemak, karbohidrat. |
Ini adalah sekumpulan reaksi sintesis biologi. |
Dari bahan yang memasuki sel dari luar, molekul terbentuk, serupa dengan sebatian sel, iaitu asimilasi berlaku. |
|
|
Pertukaran tenaga reput |
Proses bertentangan dengan sintesis. Ini adalah kumpulan reaksi pembelahan. |
Apabila sebatian molekul tinggi pecah, tenaga dibebaskan, yang diperlukan untuk reaksi biosintesis, iaitu, penyebaran berlaku.
|
Jadual 2.1.2. Perbezaan metabolisme untuk pengenalan.
|
№ |
Pilihan |
|
Keupayaan menggunakan pelbagai bahan sebagai sumber karbon. |
|
|
Keupayaan untuk membentuk produk akhir tertentu sebagai hasil penguraian substrat. |
|
|
Keupayaan untuk mencampurkan pH medium penanaman ke sisi berasid atau alkali.Metabolisme kebanyakan bakteria dilakukan melalui reaksi biokimia penguraian bahan organik (lebih jarang anorganik) dan sintesis komponen sel bakteria dari sebatian yang mengandungi karbon sederhana. |
Jadual 2.2 Anabolisme (metabolisme konstruktif)
|
№ |
Kumpulan tindak balas anabolik |
Disintesis: |
|
Biosintesis monomer |
Asid amino, nukleotida, monosakarida, asid lemak |
|
|
Biosintesis polimer |
Protein, asid nukleik, polisakarida dan lipid |
Skim 2.2.2. Biosintesis asid amino dalam prokariota.
Pengarang - L.B. Borisov, hlm. 52 "Mikrobiologi Perubatan"
Skim 2.2.1. Biosintesis karbohidrat dalam mikroorganisma.
Pengarang - L.B. Borisov, hlm. 51 "Mikrobiologi Perubatan"
Rajah 2.2.3. Biosintesis lipid
Jadual 2.2.4. Tahap metabolisme tenaga - Katabolisme.
|
№ |
Tahap |
Ciri |
Catatan |
|
Persediaan |
Molekul disakarida dan polisakarida, protein dipecah menjadi molekul kecil - glukosa, gliserin dan asid lemak, asid amino. Molekul asid nukleik besar setiap nukleotida. |
Pada tahap ini, sejumlah kecil tenaga dibebaskan, yang dihilangkan dalam bentuk panas. |
|
|
Anoksik atau tidak lengkap atau anaerobik atau ditapai atau disebar. |
Bahan-bahan yang terbentuk pada tahap ini dengan penyertaan enzim semakin menurun. Contohnya: glukosa dipecah menjadi dua molekul asid laktik dan dua molekul ATP. |
ATP dan H3PO4 terlibat dalam reaksi pembelahan glukosa. Semasa pemecahan glukosa bebas oksigen, 40% tenaga disimpan dalam molekul ATP dalam bentuk ikatan kimia, selebihnya dihilangkan dalam bentuk panas. Dalam semua kes pemecahan satu molekul glukosa, dua molekul ATP terbentuk. |
|
|
Tahap pernafasan aerobik atau kerosakan oksigen. |
Apabila oksigen tersedia untuk sel, zat yang terbentuk pada tahap sebelumnya dioksidakan (dipecah) ke produk akhirCO dan HO. |
Jumlah persamaan pernafasan aerobik:
|
Skim 2.2.4. Penapaian.
Metabolisme penapaian -dicirikan oleh pembentukan ATP melalui fosforilasi substrat.
-
Pertama (pengoksidaan) = pembelahan
-
Kedua (pemulihan)
Termasuk penukaran glukosa menjadi asid piruvik.
Termasuk pemulihan hidrogen untuk pemulihan asid piruvik.
Jalan untuk pembentukan asid piruvik dari karbohidrat
Skim 2.2.5. Asid piruvik.
Laluan glikolitik (laluan Embden-Meyerhof-Parnassus)
Jalan Entner-Dudorov
Laluan fosfat pentosa
Jadual 2.2.5. Penapaian.
|
№ |
Jenis penapaian |
Perwakilan |
Produk akhir |
Catatan (sunting) |
|
Asid laktik |
|
Membentuk asid laktik dari piruvat |
Dalam beberapa kes (penapaian homoferment) hanya asid laktik yang terbentuk, yang lain juga produk sampingan. |
|
|
Asid formik |
|
Asid formik adalah salah satu produk akhir. (bersama-sama dengannya) |
Sebilangan enterobacteriaceae memecah asid formik kepada H2 dan CO2 / |
|
|
Asid butik |
|
Asid butik dan produk sampingan |
Beberapa jenis clostridia, bersama dengan butirat dan asid lain, membentuk butanol, aseton, dan lain-lain (maka ia disebut fermentasi aseton-butil). |
|
|
Asid propionik |
|
Membentuk asid propionik dari piruvat |
Banyak bakteria menapai karbohidrat bersama dengan makanan lain untuk membentuk etil alkohol. Walau bagaimanapun, ia bukan produk utama. |
Jadual 2.3.1. Sistem sintesis protein, pertukaran ion.
|
№ |
Nama barang |
Ciri |
|
Subunit Ribosomal 30S dan 50S |
Dalam kes ribosom 70S bakteria, subunit 50S mengandungi 23S rRNA (panjang 3000 nukleotida) dan subunit 30S mengandungi 16S rRNA (panjang 1500 nukleotida); subunit ribosom besar, selain rRNA "panjang", juga mengandungi satu atau dua rRNA "pendek" (5S rRNA subunit ribosom bakteria 50S atau 5S dan 5.8S rRNA subunit ribosomal eukariota). (Untuk lebih jelasnya, lihat Gambar 2.3.1.) |
|
|
Messenger RNA (mRNA) |
RNA mengandungi maklumat mengenai struktur utama (urutan asid amino) protein |
|
|
Satu set lengkap dua puluh aminoacyl-tRNA, untuk pembentukan yang diperlukan asid amino yang sesuai, aminoacyl-tRNA synthetases, tRNA dan ATP |
Ini adalah asid amino, yang dibebankan dengan tenaga dan terikat pada tRNA, siap dibawa ke ribosom dan dimasukkan ke dalam polipeptida yang disintesis di atasnya. |
|
|
RNA pengangkutan (tRNA) |
Asid ribonukleik, fungsinya adalah untuk mengangkut asid amino ke tempat sintesis protein. |
|
|
Faktor permulaan protein |
(dalam prokariota - IF-1, IF-2, IF-3) Mereka mendapat nama mereka kerana terlibat dalam organisasi kompleks aktif (kompleks 708) dari subunit 30S dan 50S, mRNA dan pemula aminoacyl-tRNA ( dalam prokariota - formylmethionyl -tRNA), yang "memulakan" (memulakan) kerja ribosom - terjemahan mRNA. |
|
|
Faktor pemanjangan protein |
(dalam prokariota - EF-Tu, EF-Ts, EF-G) Berpartisipasi dalam pemanjangan (pemanjangan) rantai polipeptida yang disintesis (peptidil). Faktor pelepasan protein (RF) memberikan pemisahan polipeptida spesifik kodon dari ribosom dan akhir sintesis protein. |
|
|
№ |
Nama barang |
Ciri |
|
Faktor penamatan protein |
(dalam prokariota - RF-1, RF-2, RF-3) |
|
|
Beberapa faktor protein lain (persatuan, pemisahan subunit, pelepasan, dll.). |
Faktor terjemahan protein diperlukan untuk fungsi sistem |
|
|
Guanosin Triphosfat (GTP) |
Untuk penyiaran, penyertaan GTF diperlukan. Keperluan sistem sintesis protein untuk GTP sangat spesifik: ia tidak dapat digantikan oleh trifosfat lain. Sel membelanjakan lebih banyak tenaga untuk biosintesis protein daripada pada sintesis biopolimer lain. Pembentukan setiap ikatan peptida baru memerlukan pembelahan empat ikatan tenaga tinggi (ATP dan GTP): dua untuk memuat molekul tRNA dengan asid amino, dan dua lagi semasa pemanjangan - satu semasa pengikatan aa-tRNA dan yang lain semasa melakukan translokasi. |
|
|
Kation tak organik pada kepekatan tertentu. |
Untuk mengekalkan pH sistem dalam had fisiologi. Ion amonium digunakan oleh beberapa bakteria untuk mensintesis asid amino, ion kalium digunakan untuk mengikat tRNA ke ribosom. Ion besi dan magnesium memainkan peranan kofaktor dalam sejumlah proses enzimatik |
Rajah 2.3.1. Perwakilan skematik struktur ribosom prokariotik dan eukariotik.
Pengarang - Korotyaev, hlm. 68 "Mikrobiologi Perubatan"
Jadual 2.3.2. Ciri pertukaran ion dalam bakteria.
|
№ |
Kekhususan |
Dikategorikan sebagai: |
|
|
Tekanan osmotik tinggi |
Oleh kerana kepekatan ion kalium intraselular dalam bakteria, tekanan osmotik yang tinggi dipertahankan. |
||
|
Pengambilan zat besi |
Untuk sebilangan bakteria patogen dan oportunistik (Escherichia, Shigella, dll.), Pengambilan zat besi di dalam badan inang sukar kerana tidak larut pada nilai pH neutral dan sedikit alkali. |
Siderophores -bahan khas yang, dengan mengikat besi, menjadikannya larut dan mudah dibawa. |
|
|
Asimilasi |
Bakteria secara aktif mengasimilasikan anion SO2 / dan PO34 + dari persekitaran untuk sintesis sebatian yang mengandungi unsur-unsur ini (asid amino yang mengandung sulfur, fosfolipid, dll.). |
||
|
Yunus |
Untuk pertumbuhan dan pembiakan bakteria, sebatian mineral diperlukan - ion NH4 +, K +, Mg2 +, dan lain-lain (untuk lebih jelasnya, lihat Jadual 2.3.1.) |
||
Jadual 2.3.3. Pertukaran ion
|
№ |
Nama sebatian mineral |
Fungsi |
|
NH4 + (ion amonium) |
Digunakan oleh sebilangan bakteria untuk mensintesis asid amino |
|
|
K + (ion kalium) |
|
|
|
Fe2 + (ion besi) |
|
|
|
Mg2 + (ion magnesium) |
||
|
SO42- (anion sulfat) |
Diperlukan untuk sintesis sebatian yang mengandungi unsur-unsur ini (asid amino yang mengandung sulfur, fosfolipid, dll.) |
|
|
PO43- (anion fosfat) |
Skema 2.4.1. Metabolisme tenaga.
Untuk sintesis, bakteria perlu ...
-
Nutrien
-
Tenaga
Jadual 2.4.1. Metabolisme tenaga (pengoksidaan biologi).
|
№ |
Proses |
Perlu: |
|
Sintesis komponen struktur sel mikroba dan penyelenggaraan proses penting |
Jumlah tenaga yang mencukupi. Keperluan ini dipenuhi oleh pengoksidaan biologi, akibatnya molekul ATP disintesis. |
|
|
Tenaga (ATP) |
Bakteria besi menerima tenaga yang dilepaskan semasa pengoksidaan zat besi langsung mereka (Fe2 + hingga Fe3 +), yang digunakan untuk memperbaiki CO2, bakteria yang memetabolismekan sulfur, memberi mereka tenaga kerana pengoksidaan sebatian yang mengandung sulfur. Walau bagaimanapun, sebilangan besar prokariota memperoleh tenaga melalui dehidrogenasi. Tenaga juga diterima dalam proses pernafasan (untuk jadual terperinci, lihat bahagian yang sesuai). |
Skim 2.4. Pengoksidaan biologi pada prokariota.
Penguraian polimer menjadi monomer
Tahap I
Protein
Lemak
Karbohidrat
gliserin dan asid lemak
asid amino
monosakarida
Penguraian dalam keadaan anoksik
Tahap II
Pembentukan produk perantaraan
Pengoksidaan dalam keadaan oksigen ke produk akhir
Tahap III
CO2
H2O
Jadual 2.4.2. Metabolisme tenaga.
|
№ |
Konsep |
Ciri |
|
Hakikat Metabolisme Tenaga |
Membekalkan tenaga sel yang diperlukan untuk manifestasi kehidupan. |
|
|
ATF |
Molekul ATP disintesis sebagai hasil pemindahan elektron dari penderma utamanya ke penerima akhir. |
|
|
Nafas |
|
|
|
Menggerakkan tenaga |
Tenaga digerakkan dalam reaksi pengoksidaan dan pengurangan. |
|
|
Tindak balas pengoksidaan |
Keupayaan zat untuk menderma elektron (mengoksidakan) |
|
|
Reaksi Pemulihan |
Keupayaan bahan untuk melekatkan elektron. |
|
|
Potensi redoks |
Keupayaan zat untuk menderma (mengoksidakan) atau menerima (memulihkan) elektron. (ungkapan kuantitatif) |
Skim 2.5. Sintesis.
SINTESIS
protein
lemak
karbohidrat
Jadual 2.5.1. Sintesis
|
№ |
Nama |
Ciri |
|
Cytoplasma |
Sintesis produk awal berlaku dalam sitoplasma. |
|
|
Membran sitoplasma |
Produk awal dari sitoplasma dipindahkan ke permukaan luar membran sitoplasma. |
|
|
Morfogenesis |
Pada CPM, morfogenesis bermula, iaitu pembentukan struktur selular (kapsul, dinding sel, dll.) Dengan penyertaan enzim. |
Jadual 2.5.1. Sintesis
|
№ |
Biosintesis |
Dari apa |
Catatan (sunting) |
|
Saya |
Biosintesis karbohidrat |
Autotrof mensintesis glukosa dari CO2. Heterotrof mensintesis glukosa dari sebatian yang mengandungi karbon. |
Kitaran Calvin (lihat gambarajah 2.2.1.) |
|
II |
Biosintesis asid amino |
Sebilangan besar prokariota dapat mensintesis semua asid amino dari:
|
Sumber tenaga adalah ATP. Pyruvate terbentuk dalam kitaran glikolitik. Mikroorganisma Auxotrophic - dimakan siap pakai dalam badan inang. |
|
III |
Biosintesis lipid |
Lipid disintesis dari sebatian yang lebih sederhana - produk metabolik protein dan karbohidrat |
Protein pemindahan asetil memainkan peranan penting. Mikroorganisma Auxotrophic - memakan siap pakai di badan inang atau dari media nutrien. |
Jadual 2.5.2. Tahap utama biosintesis protein.
|
№ |
Tahap |
Ciri |
Catatan (sunting) |
|
Transkripsi |
Proses sintesis RNA pada gen. Ini adalah proses menulis semula maklumat dari gen - DNA ke gen mRNA. |
Ia dilakukan menggunakan RNA - polimerase yang bergantung pada DNA. Pemindahan maklumat mengenai struktur protein ke ribosom berlaku dengan bantuan mRNA. |
|
|
Siaran (penghantaran) |
Proses biosintesis protein sendiri. Proses penyahkodan kod genetik dalam mRNA dan menerapkannya dalam bentuk rantai polipeptida. |
Oleh kerana setiap kodon mengandungi tiga nukleotida, teks genetik yang sama dapat dibaca dalam tiga cara yang berbeza (bermula dari nukleotida pertama, kedua dan ketiga), iaitu, dalam tiga kerangka bacaan yang berbeza. |
-
Catatan untuk jadual: Struktur utama setiap protein adalah urutan asid amino di dalamnya.
Skim 2.5.2. Rantai pemindahan elektron dari penderma utama hidrogen (elektron) ke penerima akhir O2.
Bahan organik
(penderma elektron utama)
NAD (- 0.32)
Flavoprotein (- 0,20)
Quinone (- 0, 07)
Sitokrom (+0.01)
Sitokrom C (+0.22)
Sitokrom A (+0.34)
O2 (+0.81)
penerima akhir
Jadual 3.1. Pengelasan organisma mengikut jenis makanan.
|
№ |
Unsur organogenik |
Jenis makanan |
Ciri |
|
Karbon (C) |
|
Mereka sendiri mensintesis semua komponen sel yang mengandungi karbon dari CO2. |
|
|
Mereka tidak dapat memenuhi keperluan mereka dengan CO2, mereka menggunakan sebatian organik siap pakai. |
||
|
Sumber makanan adalah substrat organik yang mati. |
||
|
Sumber makanan adalah tisu hidup haiwan dan tumbuhan. |
||
|
Nitrogen (N) |
|
Memenuhi keperluan mereka dengan nitrogen atmosfera dan mineral |
|
|
Memerlukan sebatian nitrogen organik yang sudah siap. |
||
|
Hidrogen (H) |
Sumber utamanya ialah H2O |
||
|
Oksigen (O) |
|||
Jadual 3.1.2. Transformasi tenaga
|
№ |
Pengelasan |
Nama |
Dikehendaki: |
|
Dengan sumber tenaga |
|
cahaya matahari |
|
|
Reaksi redoks |
||
|
Oleh penderma elektron |
|
Sebatian bukan organik (H2, H2S, NH3, Fe, dll.) |
|
|
Sebatian organik |
Jadual 3.1.3. Kaedah pemberian karbon
|
№ |
Sumber tenaga |
Penderma elektron |
Kaedah pemberian karbon |
|
Tenaga cahaya matahari |
Sebatian tak organik |
Fotolitoheterotrof |
|
|
Sebatian organik |
Photoorganoheterotrophs |
||
|
Reaksi redoks |
Sebatian tak organik |
Chemolithoheterotrophs |
|
|
Sebatian organik |
Chemoorganoheterotrophs |
Jadual 3.2. Mekanisme kuasa:
|
№ |
Mekanisme |
Syarat |
Kecerunan kepekatan |
Kos tenaga |
Kekhususan substrat |
|
Penyebaran pasif |
Kepekatan nutrien dalam medium melebihi kepekatan dalam sel. |
Dengan kecerunan kepekatan |
– |
– |
|
|
Penyebaran difasilitasi |
Protein meresap terlibat. |
Dengan kecerunan kepekatan |
– |
+ |
|
|
Pengangkutan aktif |
Protein meresap terlibat. |
Terhadap kecerunan kepekatan |
+ |
+ |
|
|
3A |
Translokasi kumpulan kimia |
Semasa proses pemindahan, perubahan kimia nutrien berlaku. |
Terhadap kecerunan kepekatan |
+ |
+ |
Jadual 3.3. Pengangkutan nutrien dari sel bakteria.
|
№ |
Nama |
Ciri |
|
Tindak balas fosfotransferase |
Berlaku apabila fosforilasi molekul yang dipindahkan. |
|
|
Rembesan terjemahan |
Dalam kes ini, molekul yang disintesis mesti mempunyai urutan asid amino terkemuka khas untuk melekat pada membran dan membentuk saluran melalui mana molekul protein dapat melepaskan diri ke persekitaran. Oleh itu, toksin tetanus, difteri dan molekul lain dilepaskan dari sel-sel bakteria yang sesuai. |
|
|
Pemula membran |
Molekul yang terbentuk di dalam sel dikelilingi oleh vesikel membran, yang terlepas ke persekitaran. |
Jadual 4. Pertumbuhan.
|
№ |
Konsep |
Definisi konsep. |
|
Ketinggian |
Peningkatan jumlah bahan hidup yang tidak dapat dipulihkan, selalunya disebabkan oleh pembelahan sel.Sekiranya pada organisma multiselular peningkatan ukuran badan biasanya diperhatikan, maka pada organisma multisel jumlah sel bertambah. Tetapi walaupun pada bakteria, peningkatan jumlah sel dan peningkatan jisim sel harus dibezakan. |
|
|
Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteria in vitro. |
Mycobacterium leprae tidak mampu in vitro Pertumbuhan klamidia (termasuk parasit)
|
|
|
Penilaian pertumbuhan bakteria |
Pengukuran pertumbuhan biasanya dilakukan dalam media cair di mana bakteria yang tumbuh membentuk suspensi homogen. Peningkatan jumlah sel ditentukan dengan menentukan kepekatan bakteria dalam 1 ml, atau peningkatan massa sel ditentukan dalam unit berat per unit isipadu. |
Faktor pertumbuhan
Lipid
Asid amino
Vitamin
Asas nitrogen
Jadual 4.1. Faktor pertumbuhan
|
№ |
Faktor pertumbuhan |
Ciri |
Fungsi |
|
|
Asid amino |
|
Banyak mikroorganisma, terutamanya bakteria, memerlukan satu atau lebih asid amino (satu atau lebih), kerana mereka tidak dapat mensintesisnya sendiri. Mikroorganisma seperti ini disebut auxotrophic untuk asid amino atau sebatian lain yang tidak dapat mereka sintesis. |
||
|
Asas purin dan turunannya |
Nukleotida:
|
Mereka adalah faktor pertumbuhan bakteria. Beberapa jenis mikoplasma memerlukan nukleotida. Diperlukan untuk membina asid nukleik. |
||
|
Asas pyrimidine dan turunannya |
Nukleotida
|
|||
|
№ |
Faktor pertumbuhan |
Ciri |
Fungsi |
|
|
Lipid |
|
Bahagian lipid membran |
||
|
||||
|
Adakah komponen fosfolipid |
|||
|
Dalam mikoplasma, mereka adalah sebahagian daripada membran sitoplasma |
|||
|
||||
|
Vitamin (terutamanya kumpulan B) |
|
Staphylococcus aureus, pneumococcus, Brucella |
||
|
Semua jenis bakteria berbentuk batang |
|||
|
Bifidobakteria dan asid propionik |
|||
|
Beberapa jenis streptokokus, tetanus bacilli |
|||
|
Bakteria penambah ragi dan nitrogen Rhizobium |
|||
|
Hemes - komponen sitokrom |
Bakteria hemofilik, mycobacterium tuberculosis |
|||
Jadual 5. Bernafas.
|
№ |
Nama |
Ciri |
|
Nafas |
Pengoksidaan biologi (reaksi enzimatik) |
|
|
Pangkalan |
Nafas didasarkan pada reaksi redoks yang membawa kepada pembentukan ATP, penumpuk tenaga kimia sejagat. |
|
|
Proses |
Semasa bernafas, proses berikut berlaku:
|
|
|
Pernafasan aerobik |
Penerima akhir hidrogen atau elektron adalah oksigen molekul. |
|
|
Pernafasan anaerobik |
Penerima hidrogen atau elektron adalah sebatian bukan organik - NO3-, SO42-, SO32-. |
|
|
Penapaian |
Sebatian organik adalah penerima hidrogen atau elektron. |
Jadual 5.1. Pengelasan pernafasan.
|
№ |
Bakteria |
Ciri |
Catatan (sunting) |
|
Anerob yang ketat |
|
|
|
|
Aerob yang ketat |
|
Aerob yang ketat merangkumi, misalnya, wakil genus Pseudomonas |
|
|
№ |
Bakteria |
Ciri |
Catatan (sunting) |
|
Anaerob fakultatif |
|
Anerob fakultatif termasuk enterobakteria dan banyak ragi yang dapat beralih dari pernafasan di hadapan O2 ke fermentasi sekiranya tidak ada O2. |
|
|
Microaerophiles |
Mikroorganisma yang memerlukan, berbeza dengan anaerob yang ketat, kehadiran oksigen di atmosfer atau medium nutrien untuk pertumbuhannya, tetapi dalam kepekatan yang berkurang dibandingkan dengan kandungan oksigen di udara biasa atau di tisu normal badan tuan rumah (berbeza dengan aerob , untuk pertumbuhan yang kandungan oksigen normal di atmosfera atau medium nutrien). Banyak microaerophiles juga capnophiles, iaitu, mereka memerlukan peningkatan kepekatan karbon dioksida. |
Di makmal, organisma seperti itu mudah dibiakkan dalam "balang lilin". "Lilin balang" adalah bekas di mana lilin pembakar diperkenalkan sebelum ditutup dengan penutup kedap udara. Api lilin akan menyala hingga dipadamkan dari kekurangan oksigen, akibatnya atmosfera tepu dengan karbon dioksida dengan kandungan oksigen yang berkurang terbentuk di dalam kaleng. |
Jadual 6. Ciri pembiakan.
|
№ |
Nama |
Ciri |
|
Pembiakan |
Istilah "penyebaran" merujuk kepada peningkatan jumlah sel dalam populasi. Sebilangan besar prokariota berkembang biak dengan pembahagian melintang, beberapa dengan pemula. Kulat membiak dengan sporulasi. |
|
|
Ke mana hendak pergi |
Apabila sel mikroba membiak, proses terpenting berlaku dalam nukleus (nukleoid), yang mengandungi semua maklumat genetik dalam molekul DNA untai dua. |
Skema 6. Ketergantungan jangka masa penjanaan dari pelbagai faktor.
Tempoh penjanaan
Jenis bakteria
Umur
Penduduk
Suhu
Komposisi medium nutrien
Jadual 6.1. Fasa pembiakan bakteria.
|
№ |
Fasa |
Ciri |
|
Saya |
Fasa pegun awal |
Berlangsung 1-2 jam. Semasa fasa ini, bilangan sel bakteria tidak meningkat. |
|
II |
Fasa lag (fasa kelewatan pembiakan) |
Ia dicirikan oleh permulaan pertumbuhan sel yang intensif, tetapi kadar pembahagian sel tetap rendah. |
|
III |
Fasa log (logaritma) |
Berbeza dengan kadar pembiakan sel maksimum dan peningkatan jumlah populasi bakteria secara eksponensial |
|
IV |
Fasa pecutan negatif |
Ia dicirikan oleh aktiviti sel bakteria yang lebih rendah dan memanjangkan jangka masa penjanaan. Ini berlaku akibat penipisan medium nutrien, pengumpulan produk metabolik di dalamnya dan kekurangan oksigen. |
|
V |
Fasa pegun |
Ia dicirikan oleh keseimbangan antara bilangan sel mati, baru terbentuk dan tidak aktif. |
|
VI |
Fasa kiamat |
Ia berlaku pada kadar tetap dan digantikan oleh fasa UP-USH iaitu penurunan kadar kematian sel. |
Skim 7. Keperluan untuk media budaya.
Keperluan
Kelikatan
Kelembapan
Kemandulan
Nilai pemakanan
Ketelusan
Isotonik
pH persekitaran
Jadual 7. Pembiakan bakteria pada media nutrien.
|
№ |
Medium nutrien |
Ciri |
|
|
Media nutrien padat |
Pada media nutrien padat, bakteria membentuk koloni - sekumpulan sel. |
||
|
S - jenis (halus - halus dan berkilat) Bulat, dengan tepi yang rata, licin, cembung. |
R - jenis (kasar - kasar, tidak rata) Bentuknya tidak teratur dengan tepi bergerigi, kasar, lekuk. |
||
|
Media kultur cecair |
|
||
Jadual 7.1. Pengelasan media budaya.
|
№ |
Pengelasan |
Pandangan |
Contohnya |
|
Mengikut komposisi |
Ringkas |
|
|
|
Kompleks |
|
||
|
Dengan janji temu |
Yang utama |
|
|
|
Elektif |
|
||
|
Pembezaan - diagnostik |
|
||
|
Istimewa |
|
||
|
Secara konsisten |
Padat |
|
|
|
Cecair |
|
||
|
Separa cecair |
|
||
|
Mengikut asal |
Semula jadi |
|
|
|
Separa sintetik |
|
||
|
Sintetik |
|
Jadual 7.2. Prinsip pengasingan kultur sel tulen.
|
Prinsip mekanikal |
Prinsip biologi |
|
KAEDAH 1. Pencairan pecahan L. Pasteur 2. Pencairan plat R. Koch 3. Tanaman permukaan Drigalsky 4. Pukulan permukaan |
KAEDAH Pertimbangkan: a - jenis pernafasan (kaedah Fortner); b - mobiliti (kaedah Shukevich); c - ketahanan asid; d - sporulasi; d - suhu optimum; e - kepekaan selektif haiwan makmal terhadap bakteria |
Jadual 7.2.1. Tahap pengasingan kultur sel tulen.
|
№ |
Pentas |
Ciri |
|
Penyelidikan Tahap 1 |
Keluarkan bahan patologi. Ia dikaji - penampilan, konsistensi, warna, bau dan tanda-tanda lain, smear disiapkan, dicat dan diperiksa di bawah mikroskop. |
|
|
Penyelidikan tahap 2 |
Di permukaan medium nutrien padat, mikroorganisma membentuk pertumbuhan berterusan, padat atau koloni terpencil.Tanah jajahan - Ini adalah pengumpulan bakteria yang dapat dilihat oleh mata kasar di permukaan atau ketebalan medium nutrien. Sebagai peraturan, setiap koloni terbentuk dari keturunan satu sel mikroba (klon), oleh itu komposisi mereka cukup homogen. Ciri-ciri pertumbuhan bakteria pada media nutrien adalah manifestasi sifat budaya mereka. |
|
|
Penyelidikan peringkat 3 |
Sifat pertumbuhan budaya mikroorganisma tulen dikaji dan pengenalpastiannya dijalankan. |
Jadual 7.3. Pengenalpastian bakteria.
|
№ |
Nama |
Ciri |
|
Pengenalan biokimia |
Penentuan jenis patogen oleh sifat biokimia |
|
|
Pengenalan serologi |
Untuk menentukan spesies bakteria, struktur antigeniknya sering dikaji, yaitu, mereka dikenal pasti oleh sifat antigenik. |
|
|
Pengenalpastian oleh sifat biologi |
Kadang kala bakteria dikenal pasti dengan menjangkiti haiwan makmal dengan kultur murni dan memerhatikan perubahan yang disebabkan oleh patogen dalam badan. |
|
|
Pengenalan budaya |
Penentuan jenis patogen oleh ciri budaya mereka |
|
|
Pengenalan morfologi |
Penentuan jenis bakteria dengan ciri morfologi mereka |
Ujian kawalan penilaian
-
Proses manakah yang tidak berkaitan dengan fisiologi bakteria?
-
Ketinggian
-
Pembiakan
-
Mutasi
-
Pemakanan
-
Bahan apa yang membentuk 40 - 80% jisim kering sel bakteria?
-
Karbohidrat
-
Protein
-
Lemak
-
Asid nukleik
-
Apakah kelas enzim yang disintesis oleh mikroorganisma?
-
Reduktase oksigen
-
Semua kelas
-
Transferases
-
Ligase
-
Enzim, kepekatan yang mana dalam sel meningkat dengan ketara sebagai tindak balas terhadap kemunculan substrat induktor dalam medium?
-
Tidak boleh dipercayai
-
Perlembagaan
-
Menindas
-
Kompleks multienzim
-
Enzim patogenik yang dirembeskan oleh Staphylococcus aureus?
-
Neuraminidase
-
Hyaluronidase
-
Lecithinase
-
Fibrinolysin
-
Adakah enzim proteolitik berfungsi?
-
Pecahan protein
-
Memecahkan lemak
-
Pecahan karbohidrat
-
Pembentukan alkali
-
Penapaian Enterobacteriaceae?
-
Asid laktik
-
Asid formik
-
Asid propionik
-
Asid butik
-
Sebatian mineral apa yang digunakan untuk mengikat t-RNA ke ribosom?
-
NH4
-
K +
-
Fe2 +
-
Mg2 +
-
Pengoksidaan biologi adalah ...?
-
Pemakanan
-
Pembiakan
-
Nafas
-
Kematian sel
-
Bahan apa yang mensintesiskan semua komponen sel yang mengandungi karbon dari CO2.
-
Prototrof
-
Heterotrof
-
Autotrof
-
Saprophytes
-
Media budaya berbeza:
-
Mengikut komposisi
-
Secara konsisten
-
Dengan janji temu
-
Semua di atas
-
Fasa pembiakan, yang dicirikan oleh keseimbangan antara bilangan sel mati, baru terbentuk dan tidak aktif?
-
Fasa lag
-
Fasa log
-
Fasa pecutan negatif
-
Fasa pegun
-
Tempoh penjanaan bergantung pada?
-
Spesies
-
Umur
-
Penduduk
-
Semua di atas
-
Untuk menentukan spesies bakteria, struktur antigennya sering dikaji, iaitu identifikasi dilakukan, yang mana?
-
Biologi
-
Morfologi
-
Serologi
-
Biokimia
-
Kaedah penyemaian permukaan Drygalski disebut sebagai ...?
-
Prinsip mekanik pengasingan budaya murni
-
Prinsip biologi pengasingan budaya murni
Bibliografi
1. Borisov LB Mikrobiologi perubatan, virologi, imunologi: buku teks untuk madu. universiti. - M .: LLC "Agensi Maklumat Perubatan", 2005.
2. Pozdeev OK Perubatan mikrobiologi: buku teks untuk madu. universiti. - M .: GEOTAR-MED, 2005.
3. Korotyaev AI, Babichev SA Mikrobiologi perubatan, imunologi dan virologi / buku teks untuk madu. universiti. - SPb .: SpetsLit, 2000.
4. Vorobiev A.A., Bykov A.S., Pashkov E.P., Rybakova A.M. Mikrobiologi: buku teks. - M .: Perubatan, 2003.
5. Mikrobiologi perubatan, virologi dan imunologi: buku teks / ed. V.V. Zvereva, M.N.Boychenko. - M .: GEOTar-Media, 2014.
6. Panduan latihan praktikal dalam mikrobiologi perubatan, virologi dan imunologi / ed. V.V Teza. - M .: Perubatan, 2002.
Kandungan
Pengenalan 6
Komposisi bakteria dari sudut fisiologi mereka. 7
Metabolisme 14
Pemakanan (pengangkutan nutrien) 25
Tinggi 29
Nafas 31
Pembiakan 34
Komuniti mikrob 37
LAMPIRAN 49
Ujian 102
Rujukan 105
…………..
…………
Beberapa penyakit manusia dikaitkan dengan pendedahan mikrob pada badan. Apabila penyakit seperti itu terjadi di dalam tubuh manusia, perubahan kompleks terjadi, fungsi pelindung dikerahkan, bertujuan memerangi mikroba yang terperangkap.
Di antara sebilangan besar mikroorganisma, ada yang mampu menyebabkan penyakit pada manusia, haiwan dan tumbuhan. Mereka dipanggil patogen atau penyebab penyakit. Kekhususan adalah ciri mikroorganisma patogen - setiap jenisnya hanya mampu menyebabkan penyakit tertentu dengan semua tanda ciri. Sebilangan besar mikroorganisma patogen adalah mikroba dan parasit, kerana mereka mampu hidup dari zat organisma hidup.
Mikrob patogen menghasilkan bahan khas - racun yang meracuni badan dan menyebabkan keadaan yang menyakitkan. Keupayaan mikroorganisma untuk menyebabkan penyakit disebut patogenik. Ia dapat menampakkan diri ke tahap yang berbeza-beza. Tahap patogenik disebut virulensi.Virus mikroba boleh meningkat atau menurun baik dalam keadaan semula jadi dan eksperimen.
Di bawah istilah "jangkitan»Memahami proses interaksi mikroba dengan tubuh manusia, akibatnya penyakit berjangkit berlaku. Punca jangkitan adalah, pertama-tama, orang sakit dan haiwan yang melepaskan patogen ke persekitaran luaran, serta orang dan haiwan yang telah pulih dari penyakit, di mana mikroba patogen badannya terus bertahan untuk beberapa waktu (kadang-kadang sangat lama) setelah pemulihan. Orang dan haiwan yang melepaskan mikrob patogen selepas pemulihan dipanggil pembawa bakteria atau pembuangan bakteria. Orang yang tidak sakit juga boleh menjadi pembawa bakteria. Mikrob patogen yang diasingkan oleh organisma yang sakit memasuki udara, tanah, air, benda-benda dan makanan di sekitarnya, di mana ia dapat bertahan lama atau lebih lama, bergantung pada jenis mikroba.
Mikrob patogen memasuki tubuh manusia dengan pelbagai cara: melalui hubungan langsung dengan orang yang sakit, melalui udara dengan tetesan lendir terkecil dan air liur yang dikeluarkan oleh pesakit ketika batuk atau bersin (jangkitan titisan). Mikroba - agen penyebab beberapa penyakit - dikeluarkan oleh pesakit dengan najis dan air kencing. Mikroba seperti itu memasuki tubuh orang yang sihat melalui tangan kotor yang belum dicuci setelah menggunakan tandas. Tangan yang tercemar juga menyebarkan patogen ke makanan. Ejen penyebab jangkitan usus juga meresap ke dalam badan yang sihat apabila air tercemar dimakan.
Serangga dan tikus sering menjadi pembawa penyakit berjangkit. Lalat dapat membawa agen penyebab demam kepialu dan disentri, kutu - tifus, beberapa jenis nyamuk - malaria, dll. Tikus dan tikus adalah penyebar agen penyebab wabak, tularemia, antraks.
Penembusan mikrob patogen ke dalam tubuh manusia tidak selalu membawa kepada penyakitnya. Dalam permulaan dan perjalanan penyakit ini, sifat mikroba patogen yang telah menembusi tubuh, bilangan dan aktiviti mereka, serta tempat pengenalannya ke dalam tubuh dan keadaan tubuh itu sendiri memainkan peranan penting.
Untuk pembiakan mikroorganisma patogen, keadaan yang baik diperlukan, dan ia muncul apabila tubuh manusia lemah dan keupayaan pelindungnya berkurang (kerana hipotermia, kelaparan, dll.). Kerentanan terhadap jangkitan juga bergantung pada usia (pada kanak-kanak dan orang tua, ia lebih tinggi daripada pada orang dewasa).
Dari saat mikrob patogen memasuki tubuh manusia sehingga tanda-tanda penyakit muncul, jangka masa tertentu biasanya berlalu - ia disebut tempoh pendam penyakit, atau inkubasi. Selama ini, terdapat banyak pendaraban mikrob patogen dalam badan dan pengumpulan produk berbahaya dari aktiviti penting mereka. Tempoh tempoh inkubasi untuk penyakit yang berlainan tidak sama. Ia berkisar antara beberapa hari (selesema, tetanus, disentri) hingga beberapa minggu (tifus, demam kepialu), dan kadang-kadang mencapai beberapa bulan (rabies) dan bahkan bertahun-tahun (kusta).
Sekiranya anda menemui ralat, sila pilih potongan teks dan tekan Ctrl + Enter.
Media budaya - substrat yang terdiri daripada komponen yang menyediakan syarat yang diperlukan untuk penanaman mikroorganisma atau pengumpulan produk buangannya
.
Media budaya berbeza dari segi tujuan, ketekalan dan komposisi. Mengikut tujuan mereka, mereka secara konvensional dibahagikan kepada dua kumpulan utama - persekitaran diagnostik dan pengeluaran. Media budaya diagnostik merangkumi lima subkumpulan: media untuk mengembangkan pelbagai mikroorganisma; medium untuk pengasingan patogen tertentu; media pembezaan yang memungkinkan untuk membezakan antara jenis mikroorganisma tertentu; media untuk mengenal pasti mikroorganisma dan media penyimpanan yang bertujuan untuk pengayaan jenis mikroorganisma tertentu. Pengeluaran merangkumi P. dengan. digunakan dalam pengeluaran produk perubatan biologi industri (vaksin bakteria, toksoid, dll.) dan kawalan kualitinya.Media kultur untuk pengeluaran sediaan bakteria, berbeza dengan media diagnostik, tidak boleh mengandungi kekotoran yang berbahaya bagi manusia dan mempunyai kesan negatif pada proses pengeluaran (tanpa mengganggu, khususnya, dengan penghapusan produk metabolisme mikroba, organik pemberat dan bahan mineral dari sediaan yang telah disediakan).
Dengan konsistensi, media cecair, padat dan separa cecair dibezakan. Media nutrien pepejal dan separa cair disediakan dari media cair dengan menambahkan agar-agar atau (lebih jarang) gelatin pada mereka. Agar agar adalah polisakarida yang berasal dari jenis rumput laut tertentu. Agar biasanya diperkenalkan ke P. dengan. dalam kepekatan 1-2% (dalam pembuatan media separa cair - 0,2-0,4%), gelatin - 10-15%. Pada suhu 25-30 ° gelatinous mencair, oleh itu mikroorganisma tumbuh di atasnya terutamanya pada suhu bilik. Serum darah beku, telur gulung, kentang, dan media yang mengandungi silika gel 1.5% juga digunakan sebagai media padat.
Dari segi komposisi, media budaya dibahagikan kepada sederhana dan kompleks. P. ringkas dengan. menyediakan keperluan pemakanan kebanyakan mikroorganisma patogen (kaldu mesopatamia, agar mesopatamia, kaldu dan agar Hottinger, gelatin berkhasiat, air peptone, dan lain-lain). Media kompleks merangkumi media khas untuk mikroba yang tidak tumbuh pada media nutrien sederhana. Media sedemikian disediakan dengan menambahkan darah, serum, karbohidrat dan bahan lain yang diperlukan untuk pembiakan mikroorganisma tertentu ke media sederhana. Kompleks P. dengan. juga media diagnostik pembezaan, misalnya, media Giss dengan karbohidrat dan petunjuk, digunakan untuk menentukan spesies mikroba yang dikaji oleh aktiviti enzimatiknya. Beberapa media kompleks, yang disebut selektif, atau elektif, digunakan untuk pengasingan yang disasarkan pada satu atau beberapa jenis mikroorganisma dengan mewujudkan keadaan yang optimum untuk pertumbuhannya dan penghambatan pertumbuhan mikroflora yang menyertainya. Sebagai contoh, agar bismut sulfite adalah media selektif yang ketat untuk pengasingan Salmonella, agar dan media Levin adalah media selektif yang lemah untuk pengasingan enterobacteria.
Bergantung pada komposisi komponen awal, media sintetik, separa sintetik dan semula jadi juga dibezakan. Media sintetik, komponennya diketahui dengan tepat, dan agak rendah semi-sintetik, mudah digunakan dan digunakan terutamanya untuk mengkaji proses fisiologi mikroorganisma. Penggunaan media jenis ini memungkinkan untuk menentukan keperluan minimum mikroorganisma individu untuk nutrien dan, atas dasar ini, membuat media nutrien yang hanya mengandungi sebatian yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroba tertentu. Kelebihan media kultur sintetik adalah penyeragamannya, namun penggunaan media ini terhad kerana kos dan kerumitan komposisi yang tinggi (kebanyakannya mengandungi hingga 40 atau lebih ramuan). Di samping itu, mereka lebih sensitif terhadap ketidakseimbangan antara beberapa komponen P. , terutamanya asid amino, dan pertumbuhan mikroorganisma pada media tersebut lebih mudah ditindas oleh pengudaraan berlebihan atau kation toksik.
Dalam praktik mikrobiologi, mereka terus menggunakan media asal semula jadi, komposisi kimia yang tidak terkenal. Asas media semacam itu dibuat dari pelbagai bahan mentah yang berasal dari haiwan atau sayur-sayuran: daging dan penggantinya, ikan, darah haiwan, kasein, ragi, kentang, kacang soya, dan lain-lain.
Bersama dengan asas protein, media nutrien harus mengandungi unsur abu (fosfor, sulfur, kalsium, magnesium, besi) dan unsur surih (boron, molibdenum, kobalt, mangan, zink, nikel, tembaga, klorin, natrium, silikon, dll.). Bahan-bahan ini diperlukan untuk banyak proses biosintetik dalam bakteria, tetapi keperluannya dalam pelbagai jenis mikroorganisma tidak sama. Sebagai contoh, mangan dan zat besi diperlukan untuk patogen E. coli dan wabak, dan kalium untuk bakteria asid laktik. Mangan, kalsium, magnesium, kalium dan zat besi merangsang pertumbuhan bacillus antraks, dan magnesium, zat besi dan mangan merangsang pertumbuhan brucella.
Untuk penanaman banyak mikroorganisma patogen, kehadiran dalam media faktor pertumbuhan yang disebut, yang diwakili terutamanya oleh vitamin larut air, diperlukan. Walaupun bakteria tidak menggunakan bahan ini sebagai bahan plastik atau bertenaga, namun ia adalah komponen media nutrien yang sangat diperlukan, kerana ketiadaan mereka menghalang pembentukan banyak enzim. Asid organik, asas purin dan pirimidin dan asid amino juga boleh menjadi faktor pertumbuhan. Asid amino tertentu (L-cystine, D-pyroglutamic acid, dll.) Mampu merangsang pertumbuhan beberapa mikroorganisma dan, sebaliknya, menghalang pertumbuhan yang lain.
Media budaya mesti mengandungi semua unsur kimia yang diperlukan untuk mikroorganisma yang tumbuh dalam bentuk yang mudah diasimilasi dan dalam kuantiti yang optimum. Sumber karbon dalam P. s. biasanya karbohidrat yang terpisah, garam asid organik, dan juga karbon, yang merupakan sebahagian daripada sebatian yang mengandungi nitrogen (protein, peptone, asid amino, dan lain-lain), digunakan. Keperluan nitrogen dipenuhi jika terdapat protein haiwan asli dalam media (darah, serum, cecair ascitic, dll.), Pepton, asid amino, garam amonium dan bahan-bahan yang mengandungi nitrogen lain (pangkalan purin dan pyrimidine, urea, dll.) . V media nutrien buat garam mineral yang diperlukan untuk mikroorganisma. Unsur mikro yang diperlukan oleh bakteria dalam jumlah yang tidak dapat diabaikan biasanya masuk ke media nutrien baik dengan air, yang digunakan untuk menyiapkan medium, atau dengan bahan mentah yang merupakan bagian dari medium nutrien. Faktor pertumbuhan memasuki alam sekitar dengan pelbagai dialisis, ekstrak dan autolisis dalam bentuk asid amino, peptida, asas purin dan pyrimidine dan vitamin.
Bahan mentah yang mengandungi protein yang digunakan untuk penyediaan media kultur dihidrolisiskan menggunakan pelbagai enzim (pepsin, trypsin, pancreatin, papain, protease kulat, dll.) Atau asid (lebih jarang alkali). Tujuan hidrolisis adalah untuk melarutkan dan memecah protein dengan pembentukan sebatian nitrogen yang diasimilasi oleh sel mikroba: pepton, polipeptida, asid amino, yang merupakan sebahagian daripada hidrolisis yang diperoleh dengan cara ini. Untuk memenuhi keperluan pemakanan setiap jenis mikroorganisma tertentu, hidrolisis ini atau hidrolisat digunakan, bergantung pada komposisi kimianya, atau dalam komposisi P. dengan. beberapa hidrolisis diperkenalkan pada masa yang sama dalam nisbah terpakai.
Direka P. dengan. dalam komposisi dan sifat fizikokimia, ia mesti sesuai dengan keadaan kediaman semula jadi mikroorganisma. Perbezaan keperluan pemakanan mereka sangat berbeza sehingga tidak termasuk kemungkinan membuat P. universal dengan. Oleh itu, prinsip reka bentuk media moden didasarkan pada kajian komprehensif mengenai keperluan pemakanan mikroorganisma.
Media nutrien tidak hanya mengandungi nutrien yang diperlukan untuk mikroba, tetapi juga mempunyai kepekatan ion hidrogen dan hidroksil yang optimum. Sebilangan besar mikroorganisma patogen tumbuh lebih baik pada media nutrien dengan tindak balas sedikit alkali (pH 7.2-7.4).Pengecualian adalah Vibrio cholerae, pertumbuhan optimumnya adalah di zon alkali (pH 8.5-9.0), dan agen penyebab tuberkulosis, yang memerlukan reaksi sedikit berasid (pH 6.2-6.8). Untuk mengelakkan perubahan pH semasa penanaman mikroorganisma di P. dengan. tambahkan penimbal fosfat - campuran kalium fosfat mono dan tidak disubstitusi, kepekatannya dalam medium tidak boleh melebihi 0.5%.
Media budaya mesti mempunyai kelembapan dan isotonik yang mencukupi untuk sel mikroba, yang memastikan perjalanan normal proses fizikal dan kimia yang paling penting di dalamnya. Bagi kebanyakan mikroorganisma, persekitaran yang optimum adalah larutan natrium klorida 0.5%. Salah satu syarat penting untuk media kultur adalah kemandulan mereka, yang memungkinkan untuk menumbuhkan kultur mikrob murni.
Peranan penting dalam penerimaan P. oleh halaman. kualiti yang betul tergolong dalam kaedah kawalan mereka. Untuk media nutrien yang digunakan dalam pengeluaran, indikator kualiti utama adalah kecekapan (hasil) media, iaitu keupayaan untuk mengumpulkan jumlah maksimum biojisim mikroorganisma sifat penuh atau produk biosintesisnya (toksin, dll.). Dalam menilai media nutrien diagnostik, kriteria utama adalah penunjuk kepekaan - keupayaan untuk memastikan pertumbuhan mikroorganisma dalam pengenceran maksimum kultur patogen. Bergantung pada tujuan media nutrien, ketika menilai kualitinya, petunjuk lain juga digunakan - kestabilan sifat utama mikroorganisma yang tumbuh dan kadar pertumbuhannya, keparahan sifat pembezaan, dll.
Semasa menyelesaikan masalah kualiti media nutrien, pentingnya diberikan kepada standardisasi mereka, yang difasilitasi oleh penghasilan media dalam bentuk sediaan kering. Di USSR, pengeluaran media kering industri untuk pelbagai tujuan telah ditetapkan: sederhana, selektif, diagnostik pembezaan dan khas.
Bibliografi: Kozlov Yu.A. Media budaya dalam mikrobiologi perubatan, M., 1950, bibliogr .; Kaedah penyelidikan makmal di klinik, ed. V.V. Menshikov, s. 315, 343, M., 1987; Meinell J. dan Meinell E. Mikrobiologi Eksperimen, trans. dari Bahasa Inggeris, hlm. 46, M., 1967; Kaedah penyelidikan mikrobiologi dalam penyakit berjangkit, ed. G.Ya. Sinai dan O.G. Birger, hlm. 64, M., 1949; Enterobacteriaceae, ed. DALAM DAN. Pokrovsky, hlm. 258, M., 1985.
Perhatian! Artikel 'Media budaya'Hanya disediakan untuk tujuan maklumat dan tidak boleh digunakan untuk rawatan diri
